背景^[1-3]

MONO-MAC-6人急性單核細胞白血病細胞系是從一名患有急性單核細胞白血病的1歲小男孩的外周血中分離得到的，自1980年建系以來，MONO-MAC-6人急性單核細胞白血病細胞系細胞被廣泛用于單核細胞和巨噬細胞相關的機制、信號通路以及營養(yǎng)和藥物運輸?shù)妊芯恐小?/p>

MONO-MAC-6人急性單核細胞白血病細胞系

MONO-MAC-6人急性單核細胞白血病細胞系細胞培養(yǎng)方法：

1）復蘇MONO-MAC-6人急性單核細胞白血病細胞系細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）MONO-MAC-6人急性單核細胞白血病細胞系細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）MONO-MAC-6人急性單核細胞白血病細胞系細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為類；

1.細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2.4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3.將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應用^[4][5]

MONO-MAC-6人急性單核細胞白血病細胞系可以用于高血脂致大鼠心肌微血管損傷和心肌缺血性改變及與備解素關系的研究

動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)也是一個炎癥性疾病,是單核/巨噬細胞、補體和T-淋巴細胞的活化作用誘導慢性炎癥進展的結果。補體系統(tǒng)是機體體液防御機制的一個組成部分,也是一個炎癥過程的初級調節(jié)介質,近十年來已有較多的新證據(jù)表明,補體活化作用在AS損傷的起始階段和進展階段均起著重要作用。補體系統(tǒng)通過經典途經、植物凝集素途經或旁路途經激活,其中旁路途經是通過微生物表面和6個血漿糖蛋白之間的相互作用激活,備解素(Properdin,P因子)是旁路途經的正性調節(jié)劑,它作為環(huán)聚合物(如二聚體、三聚體、四聚體等)循環(huán)在血清中,通過結合在C3和C5轉化酶復合物(C3bBb和C3bnBb)上而加強其穩(wěn)定性。

盡管備解素在血漿中的濃度范圍達到4～6μg/ml,但其生理學來源還不清楚。單核細胞、T-淋巴細胞和骨髓源性細胞系(如HL-60,U-937,Mono Mac 6等)可以合成備解素,但不可能產生顯著的血漿水平,這是因為單核細胞產生備解素有賴于血液中有限的數(shù)量,而中性粒細胞(PMN)由于釋放備解素后會發(fā)生細胞脫顆?，F(xiàn)象,故推測備解素的生成更趨向于在血管、而非單獨在血液循環(huán)中。血管內皮細胞(Endothelial cell,EC)可表達大量補體系統(tǒng)相關蛋白,然而研究發(fā)現(xiàn),雖然備解素屬于補體成分,但維持在標準培養(yǎng)條件下的EC中不能檢測到備解素。

最近,已有報道剪切力作用下的EC具有合成備解素的能力,而備解素與心肌微血管改變之間的關系國內外尚無報道,了解備解素的表達與心肌微血管病變之間的關系,可能對于進一步探究補體的激活和補體。

參考文獻

[1]Contact-dependent inhibition of angiogenesis by cardiac fibroblasts in three-dimensional fibrin gels in vitro:implications for microvascular network remodeling and coronary collateral formation.V.Nehls;;Rita Herrmann;;Mirja Hühnken;;Alois Palmetshofer.Cell&Tissue Research,1998

[2]Expression of the components and regulatory proteins of the alternative complement pathway and the membrane attack complex in normal and diseased synovium.D.Guc;;P.Gulati;;C.Lemercier;;D.Lappin;;G.D.Birnie;;K.Whaley.Rheumatology International,1993

[3]Properdin:Approaching four decades of research.Karen K.Maves;;John M.Weiler.Immunologic Research,1993

[4]Pancreatic enzyme requirements for the dissociation of rat hearts for culture.David W.Speicher;;Richard L.McCarl.In Vitro,1974

[5]滕麗新.高血脂致大鼠心肌微血管損傷和心肌缺血性改變及與備解素關系的研究[D].第三軍醫(yī)大學,2005.