在細胞周期檢測或細胞死活鑒別中,經(jīng)常會用到一些核酸染料,最常用的就是碘化丙啶(簡稱PI)。然而,PI用著方便、簡單、便宜,但可能給管路清洗帶來很大的麻煩,所以很多中心不愿意將機器給大家用來做細胞周期。另外,不僅僅是碘化丙啶,其它如7-AAD等核酸染料均存在粘附液路的風險。
但實際上,只要清洗得當,還是沒關(guān)系的,大家無需過于擔心。這里介紹一些國外FLOWER總結(jié)的清洗絕招,腦洞大開!大家可根據(jù)需要選擇一種試試。
1.先跑一會兒DMSO,然后再用蒸餾水沖洗
由于PI在DMSO中的溶解度較高,所以可以考慮用DMSO先沖洗液路,但是國外有站友試了之后效果不是特別理想。
另外一個選擇就是先用DMSO跑5分鐘,然后再用Beckman Coulter的Clenz液跑5分鐘,最后再用蒸餾水跑5分鐘。
2.先跑乙醇,再用蒸餾水沖洗
是利用乙醇溶解度高的原理,但似乎效果也一般。
3.用次氯酸鈉
用終濃度0.1~0.5%的次氯酸鈉溶液。
對于特別粘沖的染料(例如AO、7-AAD等),有BD儀器用戶建議在BD沖洗步驟上增加70%乙醇,也就是說:
(1)將終濃度0.1~0.5%的次氯酸鈉溶液浸泡上樣針,將支撐架打到一邊,讓上樣針吸取1分鐘,然后支撐架打回來,按照正常跑5分鐘。
(2)用70%乙醇,重復(fù)步步驟。
(3)用蒸餾水,重復(fù)步步驟。
切記,每根管子跑完之后都要扔掉,不要重復(fù)使用。
4.PI喜歡DNA,那么我就用DNA來解決
這個原理很有意思,就是利用PI容易與DNA結(jié)合的方式,用放置了很長時間的外周血樣本,由于標本中的細胞基本上都碎了,所以白細胞釋放出大量的DNA。新加坡的Te Chih推薦可以用這類標本上機,利用DNA結(jié)合殘留的PI。
5.用咖啡因
這個想法很有意思,實屬腦洞大開,但卻有文章作為支撐。
大多數(shù)熒光染料通過靜電可粘附在流式細胞儀液路上,從而對后續(xù)樣品中的細胞產(chǎn)生影響。Bedner等人觀察到,除了漂白水以外,也可以利用咖啡因溶液(例如以PBS配制的50mM咖啡因溶液)去除液路中或已被熒光染料污染的細胞中的粘附熒光素。咖啡因?qū)I或吖啶染料有相當高的親和力,并且可以用于從染色的細胞、染色的凝膠以及靜電結(jié)合這些染料的細胞、玻璃或塑料表面去除這些異常粘附的染料。