背景及概述^[1]

肉蓯蓉為肉蓯蓉屬植物干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖，主治男子陽痿、 女子不孕、 血枯便秘等證，有“沙漠人參”之稱。近 20 年來的藥理活性研究發(fā)現(xiàn)，肉蓯蓉可防治神經(jīng)退行性疾病，能明顯地上調(diào)α3 和α7 尼古丁受體蛋白質(zhì)的表達水平。從肉蓯蓉中分離得到的單體化合物異麥角甾苷是主要活性成分之一。

制備^[1]

1、異麥角甾苷粗提物的制備

取肉蓯蓉粗粉 3 kg，用 10 倍量的水提取 3 次，每次 2 h，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至相對密度約為 1.1 (70～80 ℃) 的清膏，在攪拌下加入乙醇，醇沉質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70%，沉淀 24 h，取上清液，濾過。濾液回收乙醇并濃縮至相對密度約為 1.2 (70～80℃ ) 的乙醇浸膏。取浸膏加水分散，分別用石油醚、 乙酸乙酯、正丁醇萃取?；厥照〈驾腿∥?。

2、異麥角甾苷對照品的制備純化

取正丁醇萃取物上 Sephadex LH-20，用氯仿-甲醇 (1:1 ) 洗脫，薄層點板跟蹤，合并對應(yīng)流份，取異麥角甾苷粗提物 0.42 g，用10 mL 甲醇超聲溶解，過 0.45 μm 濾膜，備用。 吸取 1.0 mL 樣品進半制備型高效液相色譜儀，收集保留時間所在的組分，減壓回收溶劑，得異麥角甾苷粉末。

3、 純度分析

3.1薄層色譜分析

薄層板: 高效薄層層析板 ( GF254 )。 取本品加甲醇制成質(zhì)量濃度為 1 g / L 溶液，作為供試品溶液。采取上行展開方式，展距為8～10 cm。3種展開劑系統(tǒng)為氯仿-甲醇-9% 的乙酸 (10∶3 ∶0.5 ) ；二氯甲烷-甲醇-9% 的乙酸(10∶ 2∶0.4 )；乙酸乙酯－甲醇－9% 的乙酸 (10∶0.5∶0.6 )。定位后經(jīng) 254 nm 紫外波長碘、三氯化鐵( FeCl₃) 溶液顯色檢視。結(jié)果經(jīng) 3 個展開系統(tǒng) 3 種觀察方式檢識均呈單一斑點，未見雜質(zhì)斑點，符合化學(xué)品要求。

3.2面積歸一化法

精密稱取異麥角甾苷對照品，用流動相制成質(zhì)量濃度為1.0 g/ L 的樣品溶液，用光電二極管陣列 ( DAD) 檢測器檢測，選定在 350，335，305，290，250 nm 波長處測定，記錄色譜圖的時間為異麥角甾苷出峰時間的 2 倍以上，各波長下的峰面積按歸一化法計算。結(jié)果異麥角甾苷對照品在檢測時間范圍內(nèi)基本無雜質(zhì)峰出現(xiàn)，且在所選定 5 個波長處測得的平均含量為 98.8% ，符合化學(xué)對照品用于含量測定的要求，見圖A。      

4、結(jié)構(gòu)鑒定

異麥角甾苷為無色棱狀柱晶(乙醇) ，熔點為 135℃。ESI-MS m/z: 623 [M-H] ⁺，¹H NMR( CD₃OD，400 MHz) ，δ: 1.24 (3H，d，J = 6.0 Hz，Rha-CH3 )，2.78 (2H，t，J = 7.2，8.0 Hz，H-7 )，4.36 (1H，m，H-1' )，5.17 (1H，s，Rha-1 ) ， 6.30 (1H，d，J = 16.0Hz，H-8″)，6.53 (1H，d，J = 8.0 Hz，H-6 )，6.65 ( 1H，t，J = 10.0，8.4 Hz，H-5 )，6.76 (1H，d，J = 8.0 Hz，H-2 )，6.87 (1H，d，J =2.0 Hz， H-5″ )，6.89 (1H，t，J = 10.0，2.0 Hz，H-6″ ) ，7.02 (1H，s，H-2″ )，7.57 (1H， d，J = 15.9 Hz，H-7″ )。

應(yīng)用^[2]

車前子提取物，是由車前子經(jīng)過2～6倍體積的體積分?jǐn)?shù)為60～90％ 的乙醇水溶液回流提取2～6次得到，含有麥角甾苷、異麥角甾苷、京尼平苷酸、 阿魏酸、車前素A和車前素B。該車前子提取物可用于制備治療糖尿病藥物。

主要參考資料

[1]白雪,郝小燕.肉蓯蓉中異麥角甾苷標(biāo)準(zhǔn)品的制備及含量測定[J].中國藥業(yè),2013,22(09):19-20.

[2] CN201110172511.8 一種車前子提取物及其應(yīng)用