背景及概述^[1][2]

3-羥基-4-甲氧基肉桂酸中文別名異阿魏酸、3-羥基-4-甲氧基苯丙烯酸。升麻屬植物是毛莨科升麻族植物的主要成員，《中國(guó)藥典》（2005年版）收載的常用中藥升麻的原植物有3種即大三葉升麻、興安升麻和升麻，在我國(guó)分布區(qū)域廣，資源量大。升麻中含有異阿魏酸、三萜化合物、香豆素等成分，其中異阿魏酸具有解熱、鎮(zhèn)痛、消炎的作用，2010年版《中國(guó)藥典》中即規(guī)定以異阿魏酸作為衡量升麻藥材質(zhì)量的指標(biāo)成分。

應(yīng)用^[1-3]

異阿魏酸是升麻等中藥材提取物中的主要單體活性成分，具有抗氧化、降血糖的作用。有研究通過(guò)膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(Collagen induced arthritis，CIA)的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：異阿魏酸及包含異阿魏酸的中藥(如升麻)對(duì)CIA造成的多發(fā)性關(guān)節(jié)損傷具有保護(hù)作用，能夠明顯降低CIA動(dòng)物模型的發(fā)病率、關(guān)節(jié)炎平均指數(shù)、改善骨結(jié)構(gòu)破壞、降低抗二型膠原抗體和多種炎性細(xì)胞因子的分泌，說(shuō)明其具有確切的抗關(guān)節(jié)炎癥的作用，可以用來(lái)制備治療或緩解類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎癥狀的藥物或保健品。

此外，還有研究觀(guān)察阿魏酸和異阿魏酸對(duì)HepG2 細(xì)胞中細(xì)胞色素P450 同工酶1A1、3A4（CYP1A1、CYP3A4）的作用特點(diǎn)。采用MTT 比色法測(cè)定不同質(zhì)量濃度阿魏酸和異阿魏酸對(duì)體外培養(yǎng)人肝癌HepG2 細(xì)胞增殖的影響；采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定阿魏酸和異阿魏酸對(duì)HepG2 細(xì)胞周期的影響；實(shí)時(shí)定量PCR 技術(shù)檢測(cè)阿魏酸和異阿魏酸處理后CYP1A1、CYP3A4 mRNA的表達(dá)；Western blotting 檢測(cè)CYP3A4 蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示作用48 h 后，阿魏酸和異阿魏酸對(duì)HepG2 細(xì)胞均有抑制作用，且有明顯的劑量依賴(lài)關(guān)系；阿魏酸和異阿魏酸（50 μg/mL）均阻滯HepG2 細(xì)胞周期于G2/M 期；阿魏酸和異阿魏酸在不同作用質(zhì)量濃度下均是CYP1A1、CYP3A4 mRNA 的抑制劑；50 μg/mL 阿魏酸和異阿魏酸處理細(xì)胞48 h 后，CYP3A4 蛋白表達(dá)均明顯低于對(duì)照組，相比于對(duì)照組，阿魏酸和異阿魏酸的表達(dá)量分別為0.57、0.39。結(jié)論 阿魏酸和異阿魏酸均能抑制HepG2細(xì)胞的增殖，其機(jī)制之一是影響細(xì)胞周期使其阻滯于G2/M 期，能夠抑制藥物代謝酶CYP1A1、CYP3A4 mRNA 的表達(dá)，同時(shí)抑制CYP3A4 的蛋白表達(dá)，但作用程度差別較大，可能與其羥基和甲氧基異構(gòu)有關(guān)。

此外，異阿魏酸還可用作醫(yī)藥中間體，如制備3，4-二氫-4-芳基香豆素類(lèi)化合物。3，4-二氫-4-芳基香豆素類(lèi)化合物作為4-芳基香豆素的氫化衍生物，具有與其相似的生物活性、研究表明4-(4'-羥基苯基)-5，7-二羥 基-8-烷基-3，4-二氫香豆素具有雌激素樣作用。如4-(3'-羥基-4'-甲氧基苯基)-7，8-二羥基-3，4-二氫香豆素的制備的制備如下：在100ml的三口反應(yīng)瓶中，加入0.97g(5mmol)3-羥基-4-甲氧基苯基丙烯酸（異阿魏酸），0.69g(5.5mmol)鄰苯三酚，10ml(98mmol)硝基苯，攪拌均勻，加熱至100℃，再加入2g硫酸酸 化的蒙脫土K-10，TLC檢測(cè)反應(yīng)進(jìn)程(展開(kāi)劑：二氯甲烷：甲醇＝10：1)，10小時(shí)后反應(yīng)完畢，趁熱過(guò)濾，濾液中加20ml石油醚，放置一夜自然析晶，抽濾，20ml石油醚洗滌沉淀，乙酸乙酯-石油醚重結(jié)晶，真空干燥箱中干燥得白色純品0.70g，產(chǎn)率46.4％。

制備 ^[4-5]

方法1：一種ASE方法提取升麻中異阿魏酸的方法，包括以下步:驟：步驟1：將升麻粉碎后，過(guò)篩；步驟2：稱(chēng)取0.5重量份升麻粉，與1重量份石英砂混合均勻待用；步驟3：在預(yù)先放好過(guò)濾膜的萃取池中加入適量的石英砂至達(dá)到萃取池的池口；蓋上萃取池的蓋子進(jìn)行靜態(tài)萃取；萃取結(jié)束后得到萃取液；萃取條件為：萃取溶劑為40％甲醇水溶液；萃取溫度120℃；靜態(tài)萃取時(shí)間5min；沖洗體積60％；靜態(tài)循環(huán)次數(shù)4次；所述的40％甲醇水溶液為甲醇的體積百分?jǐn)?shù)為40％。

方法2： 在100ml的三口反應(yīng)瓶中加入25g(240mmol)丙二酸，30.4g(200mmol)3-羥基-4- 甲氧基苯甲醛，40ml(496mmol)吡啶，2ml(20.4mmol)六氫吡啶，加熱至75℃后回流6h，反應(yīng)完畢，冷卻10min，加入150ml3mol/ml冰鹽酸溶液，放置一夜，抽濾，用1000ml水洗滌沉淀，得到白色粗品。粗品用無(wú)水乙醇重結(jié)晶，得白色純品3-羥基-4-甲氧基苯基丙烯酸34.4g，收率 88.6％。

含量測(cè)定^[6]

一種測(cè)定升麻中異阿魏酸含量的方法，依次包括下述步驟：

步驟1：采用ASE法用丙二醇萃取粉碎后的升麻，并收集丙二醇萃取液；其中，所述的步驟1包括下述子步驟：步驟S1：將升麻樣品粉碎，過(guò)篩，取0.5g與1g石英砂混合均勻；步驟S2：將步驟S1所得的混合物裝于放有濾膜的10ml ASE萃取池中，并加石英砂至與池口平行；步驟S3：用濃度為20％～40％的丙二醇萃取，并用濃度為20％～40％的丙二醇定 容至50ml，離心，取上清液。

步驟2：采用HPLC法測(cè)定丙二醇萃取液中異阿魏酸的含量。

主要參考資料

[1] CN201810607664.2 異阿魏酸、含異阿魏酸中藥提取物及升麻的用途

[2] 阿魏酸和異阿魏酸對(duì)HepG2 細(xì)胞增殖及其細(xì)胞色素P450 酶的影響

[3] CN201510931537.4 一種3，4-二氫-4-芳基香豆素類(lèi)化合物的制備方法

[4] CN201610254586.3 一種ASE方法提取升麻中異阿魏酸的方法

[5]  CN201610495985.9 一種4-芳基香豆素類(lèi)化合物的制備方法

[6] CN201711363285.5 一種測(cè)定升麻中異阿魏酸含量的方法