背景^[1][2]

Bak基因是一個新發(fā)現(xiàn)的bcl-2家族的同源類似物，具有211個氨基酸(約23.4 kDa)，能夠促進(jìn)細(xì)胞死亡，且對抗bcl-2對凋亡的保護(hù)作用。Bak與bcl_2及其家族成員有明顯結(jié)構(gòu)上的相似性，特別是BHI和B也結(jié)構(gòu)域 。Bak與bcl-2、bcl-xL和Bax的同源性分別有25％、22％和19％。Bak在碳末端還含有疏水的跨膜結(jié)構(gòu)域，說明Bak蛋白以整合的膜蛋白的形式存在。

近兩年來，對Bak基因的研究逐漸深入。像Bax一樣，Bak基因產(chǎn)物能夠增加細(xì)胞對各種刺激的凋亡性反應(yīng)。Bak基因確實能夠顯著誘導(dǎo)HCC-9204細(xì)胞(p53基因已突變)發(fā)生凋亡。Bak基因可能作為p53基因突變的腫瘤中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的效應(yīng)分子，直接參與凋亡的發(fā)生。最近Manchester大學(xué)癌癥研究中心的一個小組針對Bak基因進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)Bak能夠接受藥物引起的細(xì)胞凋亡信號并引起細(xì)胞損傷，Bak基因在正常情況下受到其它分子的控制。

為了達(dá)到活性狀態(tài)，Bak必須脫離目前的“記憶狀態(tài)”并發(fā)生蛋白質(zhì)構(gòu)象的改變。一旦構(gòu)象發(fā)生改變，Bak就會接受細(xì)胞損傷性刺激并誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，因此，通過體外轉(zhuǎn)染Bak基因，增加細(xì)胞中Bak的表達(dá)，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，這可能作為腫瘤基因治療的一個新策略，特別是針對p53基因已發(fā)生突變的腫瘤。

Bak抗體(Bak antibody)用人工合成的人Bak蛋白Gly82附近一段多肽進(jìn)行適當(dāng)修飾后免疫rabbit，然后用protein A和抗原多肽親和柱經(jīng)過兩步純化得到的高純度抗體。Bak抗體識別的是總Bak(total Bak)，可以檢測內(nèi)源性的Bak蛋白水平，未發(fā)現(xiàn)和其它Bal-2家族蛋白有交叉反應(yīng)。BAK抗體產(chǎn)品為無色溶液形式，含有100 ug抗體.該產(chǎn)品濃度為0.5 mg/ml，溶解于包含有30% 甘油，0.5% BSA， 5 mM EDTA和0.01%硫柳汞的PBS（pH 7.2）緩沖液中。

Bak抗體-20℃保存，Western一抗稀釋液-20℃或4℃保存，一年有效。Western-抗稀釋液優(yōu)先推薦4℃保存，長期不使用可以考慮-20℃保存，但凍融可能會導(dǎo)致出現(xiàn)輕微的渾濁和少量不溶物。在Western實驗后，請注意回收稀釋的抗體。回收的抗體在進(jìn)行Western實驗時至少可以重復(fù)使用10次。稀釋后的抗體，包括已經(jīng)使用過的稀釋抗體，4℃保存。回收后重復(fù)使用的抗體，使用方法同新鮮稀釋的抗體。

如果在重復(fù)使用過程中發(fā)現(xiàn)抗體出現(xiàn)輕微混濁現(xiàn)象，可以10000g離心1-3分鐘，取上清用于后續(xù)檢測。如果回收的抗體出現(xiàn)明顯的絮狀物或長霉長菌等情況，則可以考慮廢棄該抗體。

主要參考資料

[1] 李江, 于欣欣. Bak 基因過表達(dá)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡[J]. 癌癥: 英文版, 2000, 19(9): 891-895.