背景[1-3]
人心肌細胞提取于人心臟組織，提取純化之后立即凍存。每管含有細胞數(shù)>5 x 105 cells/ml，此細胞通過Myosin免疫熒光染色驗證，經(jīng)測試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
心肌細胞呈菱形、多邊形等不規(guī)則形狀；細胞培養(yǎng)2h后開始貼壁，呈梭形；到12h左右，細胞開始伸出偽足，呈菱形、多角形；細胞分離培養(yǎng)48h以后，大部分伸出偽足、呈巴掌狀，部分心肌細胞會出現(xiàn)搏動；心肌細胞為終末分化細胞，在體外不增殖。體外培養(yǎng)的心肌細胞可保持結(jié)構(gòu)及功能上的某些特點，并具有自發(fā)性節(jié)律搏動，且心肌細胞的培養(yǎng)具有簡便、定量、重復性好以及不受神經(jīng)體液因素的影響等特點。
人心肌細胞
心肌細胞是機體上最具有活力的細胞。它的收縮是肌原性的，其活動與神經(jīng)刺激無關(guān)。所有的心肌細胞都能自律性的去極化和復極化。心肌細胞占有心臟重量的75%，但僅為心臟細胞數(shù)量的1/3。它們是高度特異的具有高氧含量且含有大量的線粒體的細胞。
已分化的心肌細胞沒有增殖能力，它們在a-shenshangxiansu的刺激下通過Ras/MEK途徑發(fā)生肥大生長。心力衰竭時，心肌細胞的肥大和凋亡表示心肌收縮功能的下降。心肌細胞具有復雜的信號網(wǎng)絡，從而調(diào)節(jié)其心臟節(jié)律性的泵出功能中的作用。該信號網(wǎng)絡是研究心肌細胞死亡的細胞信號機理的模型。
應用[4][5]
用于心水通復方水提物對缺氧誘導心肌細胞AQPs影響的研究
通過借助體外細胞,研究心水通復方水提物對AQPs基因、蛋白表達與細胞線粒體和病理形態(tài)變化之間的關(guān)系,試圖揭示該組方防治CHF的作用機制。
方法：通過體外缺氧再復氧誘導人心肌細胞,不同濃度心水通復方水提物干預人心肌細胞。運用MTT法、流式細胞術(shù)、激光共聚焦、細胞特殊染色、Real-time PCR、細胞免疫組織化學法和Western blot法,檢測細胞活性、細胞損傷和線粒體的變化,以及AQP-1、4、7基因和蛋白的表達之間的關(guān)系。
結(jié)果：1、MTT法結(jié)果顯示,與模型組相比心水通復方水提物干預組中XST-200和XST-400組的細胞存活率高于模型組,具有顯著性差異（P<0.05）。
2、流式細胞術(shù)檢測線粒體膜電位變化及激光共聚焦觀察JC-1染色結(jié)果顯示,模型組細胞線粒體膜電位明顯降低,與正常組相比有顯著性差異（P<0.05）。心水通復方水提物組中XST-400組線粒體膜電位高于模型組且有顯著性差異（P<0.05）。
3、Lysotracker Red染色結(jié)果顯示,模型組溶酶體紅色光比值明顯降低,與正常組相比有顯著性差異（P<0.05）。心水通復方水提物組中XST-400與XST-600組紅色光比值均高于模型組,與模型組相比均有顯著性差異（P<0.05）。
4、Real-time PCR結(jié)果顯示,缺氧再復氧人心肌細胞模型組AQP-1、4、7mRNA表達比正常組顯著增高（P<0.05）。在心水通復方水提物200μg/ml-600μg/ml范圍內(nèi),AQP-1mRNA的表達水平隨著濃度增加而增高；而在XST-400μg/ml,AQP-4、7mRNA的表達明顯比200μg/ml和600μg/ml降低（P<0.05）,其原因有待進一步研究。
5、細胞免疫組織化學結(jié)果顯示,在人心肌細胞中均可以檢測到AQP-1、4、7蛋白的表達。經(jīng)過缺氧再復氧人心肌細胞模型組中AQP-1、4、7蛋白表達上調(diào),模型組陽性細胞較正常對照組增多,且模型組積分光密度高于正常對照組（P<0.05）。在心水通水提物XST-200和XST-400干預組中,AQP-1的陽性細胞數(shù)比模型組少,其積分光密度比模型組低（P<0.05）。
6、Western blot結(jié)果顯示,缺氧再復氧人心肌細胞模型組中AQP-1、4、7蛋白的表達均上調(diào)。心水通水提物能劑量依賴性地上調(diào)缺氧再復氧人心肌細胞AQP-1的表達,XST-600μg/ml能將AQP-1的蛋白表達恢復到接近正常對照組水平。XST-400組能夠顯著下調(diào)AQP-4、7蛋白的表達（P<0.05）。
參考文獻
[1]Electron flow into cytochrome c coupled with reactive oxygen species from the electron transport chain converts cytochrome c to a cardiolipin peroxidase:role during ischemia–reperfusion[J].Hema S.Aluri,David C.Simpson,Jeremy C.Allegood,Ying Hu,Karol Szczepanek,Scott Gronert,Qun Chen,Edward J.Lesnefsky.BBA-General Subjects.2014(11)
[2]Aquaporin 1 plays an important role in myocardial edema caused by cardiopulmonarybypass surgery in goat[J].Yumei Yan,Jianbin Huang,Fangbao Ding,Ju Mei,Jiaquan Zhu,Hao Liu,Kun Sun.International Journal of Molecular Medicine.2013(3)
[3]The involvement of AQP1 in heart oedema induced by global myocardial ischemia[J].Fang‐Bao Ding,Yu‐Mei Yan,Jian‐Bin Huang,Ju Mei,Jia‐Quan Zhu,Hao Liu.Cell Biochem Funct.2012(1)
[4]Aquaporin-1 in cardiac endothelial cells is downregulated in ischemia,hypoxia and cardioplegia[J].Journal of Molecular and Cellular Cardiology.2012
[5]蕭璐.心水通復方水提物對缺氧誘導心肌細胞AQPs影響的研究[D].福建中醫(yī)藥大學,2015.