背景[1-3]
三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基是一種細(xì)菌培養(yǎng)基，主要是用來(lái)鑒別沙門氏與志賀氏菌屬等腸道桿菌，主要成分包括有牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、乳糖、硫酸亞鐵、氯化鈉、硫代硫酸鈉、酚紅、瓊脂、蒸餾水等。如同時(shí)含1%蔗糖，即成三糖鐵培養(yǎng)基。
三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖，只能利用葡萄糖的細(xì)菌，葡萄糖被分解產(chǎn)酸使斜面先變黃，但因量少，生產(chǎn)的少量酸。因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌生長(zhǎng)利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故斜面后來(lái)又變紅。底部由于厭氧狀態(tài)，酸類不被氧化，仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖的細(xì)菌，則產(chǎn)生大量的酸，使整個(gè)培養(yǎng)基呈黃色。另外，因某些細(xì)菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反應(yīng)生成黑色的硫化亞鐵沉淀。
三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基
成分的作用：
①蛋白胨、牛肉膏：為主要氮源，供細(xì)菌合成菌體蛋白質(zhì)，以供生長(zhǎng)繁殖之用(亦可供給能量)，也有維持滲透壓的作用。
②葡萄糖：為主要碳源，供給細(xì)菌新陳代謝活動(dòng)所需要的能量。
③氯化鈉：供細(xì)菌生長(zhǎng)需要的無(wú)機(jī)鹽，其作用為維持滲透壓、構(gòu)成菌體成分和酶的激動(dòng)劑。
④枸櫞酸鈉：為抗凝劑，不使血液凝固成塊，因此，可減少白細(xì)胞對(duì)病原菌的吞噬機(jī)會(huì)。
⑤對(duì)氨苯甲酸：能中和血中磺胺類藥物的抑菌作用。
⑥硫酸鎂：能破壞血中四環(huán)素、金霉素、土霉素、新霉素及多粘菌素等的抑菌作用。
⑦青霉素酶：可破壞青霉素。
⑧酚紅：為指示劑，細(xì)菌生長(zhǎng)后分解葡萄糖產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基pH降低，酚紅指示劑變黃，培養(yǎng)液呈黃色，即可知有細(xì)菌生長(zhǎng)。
應(yīng)用[4][5]
用于一種耐藥變形桿菌的分離、鑒定及其免疫學(xué)效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究
采用腸道菌選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基分離泌尿系統(tǒng)反復(fù)感染患者的尿液樣本中的變形桿菌，經(jīng)進(jìn)一步鑒定和傳代減毒后感染小鼠，分析脾細(xì)胞體外增殖能力和脾細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ水平及抗體變化；并通過(guò)流式細(xì)胞儀、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)分析乙肝病人外周血樹突細(xì)胞信號(hào)分子表達(dá)和IFN-γ水平變化，探討變形桿菌對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫的影響，為變形桿菌菌苗研究奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
方法1．留取泌尿系統(tǒng)反復(fù)感染患者的尿液樣本，將所取樣品用分區(qū)劃線法分別接種于腸道菌選擇培養(yǎng)基（S，S瓊脂）及鑒別培養(yǎng)基（伊紅美藍(lán)瓊脂）平皿中，置37℃溫箱培養(yǎng)18～24小時(shí)后，觀察菌落特征，在培養(yǎng)后的平皿中找到符合變形桿菌菌落特點(diǎn)的菌落。將挑出的菌落做進(jìn)一步的鑒定。
2．用Blendon鍍銀染色后觀察、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基試驗(yàn)、動(dòng)力靛基質(zhì)尿素酶試驗(yàn)、苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)對(duì)挑出的菌落作初步鑒定。
3．從泌尿系統(tǒng)反復(fù)感染患者的尿液樣本中分離的變形桿菌通過(guò)特殊的處理，將原有的毒性減低，并做毒性試驗(yàn)以證明其毒性的降低。再用三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基試驗(yàn)、動(dòng)力靛基質(zhì)尿素酶試驗(yàn)、苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)、遷徙生長(zhǎng)試驗(yàn)、硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn)、液化明膠試驗(yàn)、西蒙枸櫞酸鹽試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、氨基酸脫羧酶試驗(yàn)、糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗(yàn)（麥芽糖、木糖）、對(duì)氯霉素的敏感性試驗(yàn)對(duì)特殊處理后的菌種進(jìn)行最后鑒定。鑒定無(wú)誤后將經(jīng)特殊處理的菌種接種、培養(yǎng)、采集、殺菌、離心、純化，稀釋成2×1011／mL的原液，并對(duì)原液進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)和原液檢定。
4．將變形桿菌原液用RPMI-1640培養(yǎng)液稀釋成2×1010／mL。采集慢性乙型肝炎患者和健康人肝素抗凝外周血，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，并體外定向誘導(dǎo)分化和培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞。對(duì)照組為RPMI-1640培養(yǎng)基（含10％小牛血清）500μL+培養(yǎng)的樹突細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)組為RPMI-1640培養(yǎng)基（含10％小牛血清）500μL+培養(yǎng)的樹突細(xì)胞+變形桿菌稀釋液，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD80，CD86的表達(dá)水平。
參考文獻(xiàn)
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[5]王鵬.一種耐藥變形桿菌的分離、鑒定及其免疫學(xué)效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D].軍醫(yī)大學(xué),2007.