背景^[1-3]

油紅O染色液(培養(yǎng)細(xì)胞專用)簡(jiǎn)稱ORO染色液，可顯示最小的脂滴，可優(yōu)先為脂類從溶劑中吸附染料。標(biāo)本不采用含有乙醇的固定液，如需要固定可采用10%福爾馬林)。脂肪陽性染色結(jié)果呈橘黃至紅色，但具體顏色因脂質(zhì)濃度而定。

細(xì)胞油紅O染色圖

脂質(zhì)(Lipid)是中性脂肪、類脂及其衍生物的總稱，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑(如乙醇、乙醚等)。

人體的脂肪主要有兩種：1、儲(chǔ)存脂肪，如中性脂肪，主要分布于皮下、腎、胰腺等部位。

2、結(jié)構(gòu)脂肪，如類脂(磷脂、糖脂、膽固醇等)，主要分布于細(xì)胞內(nèi)。中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油組成的脂類，呈中性。中性脂肪是儲(chǔ)存能量的方式之一，在氧化時(shí)釋放出能量。

中性脂肪染色經(jīng)常采用蘇丹Ⅱ、蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ、蘇丹黑B、油紅O法等。傳統(tǒng)方法采用蘇丹染料，最近發(fā)現(xiàn)偶氮染料油紅O更適合脂肪的染色。

油紅O是很強(qiáng)的脂溶劑和染脂劑，較易不甘油三脂結(jié)合呈小脂滴狀，不磷脂結(jié)合力稍差，其染色原理一般認(rèn)為是物理上的溶液作用或吸附作用，借溶液作用使脂肪染色。

染料在細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的溶解度較原溶劑中的溶解度更大，所以在染色時(shí)染料就從有機(jī)溶劑轉(zhuǎn)移入脂質(zhì)而使脂肪染色。

應(yīng)用^[4][5]

用于抗精神病藥物對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化及脂聯(lián)素蛋白表達(dá)水平的影響

研究氟哌啶醇、氯氮平、奧氮平、喹硫平、利培酮、齊拉西酮6種抗精神病藥物對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化及成熟脂肪細(xì)胞中脂聯(lián)素表達(dá)水平的影響。

方法1.應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)流程對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代,并采用傳統(tǒng)的激素雞尾酒方法誘導(dǎo)其分化成為成熟脂肪細(xì)胞,應(yīng)用油紅O對(duì)誘導(dǎo)分化成熟的脂肪細(xì)胞進(jìn)行染色,鑒定其分化程度。

2. 將不同濃度的氟哌啶醇、氯氮平、奧氮平、喹硫平、利培酮、齊拉西酮（均采用0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L、四種濃度、并設(shè)置空白對(duì)照及溶媒（DMSO）對(duì)照組）加入誘導(dǎo)分化液中對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),誘導(dǎo)分化至第8天,用油紅O染色后顯微鏡下觀察并拍照記錄。

3. 應(yīng)用不同濃度的氟哌啶醇、氯氮平、奧氮平、喹硫平、利培酮、齊拉西酮（均采用0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L、四種濃度、并設(shè)置空白對(duì)照及溶媒（DMSO）對(duì)照組）對(duì)分化成熟的脂肪細(xì)胞分別干預(yù)24小時(shí)及48小時(shí),利用Western-blot檢測(cè)脂聯(lián)素蛋白表達(dá)水平。

結(jié)果1.通過傳統(tǒng)激素雞尾酒方法成功誘導(dǎo)了3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化成熟。

2.油紅O染色發(fā)現(xiàn)：較低濃度氟哌啶醇、氯氮平、奧氮平、喹硫平、齊拉西酮干預(yù)的細(xì)胞成脂率顯著高于溶媒對(duì)照組（P<0.05）,但隨著抗精神病藥物濃度升高,細(xì)胞中脂滴數(shù)量減少；較高濃度的各種藥物的細(xì)胞成脂率則顯著低于溶媒對(duì)照組,且隨濃度升高脂滴數(shù)量減少。而各濃度利培酮干預(yù)的細(xì)胞成脂率均顯著低于溶媒對(duì)照組（P<0.05）。

參考文獻(xiàn)

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