背景[1-3]
MV3人黑色素瘤細(xì)胞分離自人黑色素瘤組織經(jīng)初代培養(yǎng)后形態(tài)穩(wěn)定的細(xì)胞系，主要用于人黑色素瘤細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)研究實(shí)驗(yàn)。黑色素瘤，通常是指惡性黑色素瘤，是黑色素細(xì)胞來源的一種高度惡性的腫瘤，多發(fā)生于皮膚，也可發(fā)生于黏膜（包括內(nèi)臟黏膜）、眼葡萄膜、軟腦膜等部位。
惡性黑色素瘤分為兩大類：
原位惡性黑色素瘤：指腫瘤細(xì)胞僅局限于表皮或黏膜上皮層內(nèi)。包括惡性雀斑樣痣、淺表擴(kuò)散性原位惡性黑色素瘤、肢端原位黑色素瘤。
侵襲性惡性黑色素瘤：指腫瘤細(xì)胞已突破表皮基底層或粘膜上皮層，向真皮及更深層浸潤。包括惡性雀斑樣黑色素瘤、淺表擴(kuò)散性惡性黑色素瘤、肢端黑色素瘤和結(jié)節(jié)性黑色素瘤。
細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
應(yīng)用[4][5]
用于高表達(dá)ATF3人真皮成纖維細(xì)胞抑制皮膚黑色素瘤細(xì)胞生長遷移的作用與機(jī)制研究
BRAF是RAF家族的一種蛋白激酶,其功能位于RAS下游,通過磷酸化MEK激活ERK來幫助刺激細(xì)胞生長和存活。臨床上用于治療皮膚惡性黑色素瘤的BRAF抑制劑可短暫有效,但是大多數(shù)患者會產(chǎn)生耐藥性。
腫瘤微環(huán)境（tumor microenvironment,TME）指的是腫瘤在發(fā)生發(fā)展過程中所處的局部環(huán)境,構(gòu)成這一局部環(huán)境的細(xì)胞成分復(fù)雜,包括但不限于免疫細(xì)胞、血細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和細(xì)胞基質(zhì)。腫瘤基質(zhì)是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分,主要由成纖維細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成。在過去的幾十年里,越來越多的研究成果證實(shí)TME在決定疾病進(jìn)展和治療結(jié)果方面的作用變得越來越明顯。
腫瘤細(xì)胞與微環(huán)境之間的相互作用機(jī)制非常復(fù)雜,但可分為兩大類:即接觸式和非接觸式途徑。其中接觸式途徑涉及細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)粘附分子的接觸依賴性機(jī)制。而在非接觸式途徑中,諸多可溶性分子,如生長因子,趨化因子和細(xì)胞因子,以及可溶性的亞細(xì)胞器（包括微泡和外泌體）等在整個過程中起到至關(guān)重要的作用,最終,這些相互作用通過分泌和旁分泌機(jī)制,完成與惡性腫瘤細(xì)胞的相互作用。腫瘤微環(huán)境腫瘤基質(zhì)細(xì)胞中最主要的細(xì)胞成分為成纖維細(xì)胞。最近,越來越多的相關(guān)研究成果顯示,腫瘤基質(zhì)組織與腫瘤抗藥性的產(chǎn)生有很大關(guān)系,提示癌癥治療應(yīng)該包括靶向基質(zhì)細(xì)胞來抑制腫瘤的策略。
ATF3（activating transcription factor 3,ATF3）為ATF/CREB家族重要成員之一。作為重要的轉(zhuǎn)錄因子,ATF3在不同組織中表現(xiàn)的功能可能存在差異。ATF3基因在腫瘤發(fā)展中可能會表現(xiàn)出促癌基因和抑癌基因正反兩方面作用。
參考文獻(xiàn)
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[5]俎廷建.高表達(dá)ATF3人真皮成纖維細(xì)胞抑制皮膚黑色素瘤細(xì)胞生長遷移的作用與機(jī)制研究[D].山東大學(xué),2020.