背景^[1-3]

B16-F1小鼠黑色素瘤細(xì)胞源于C57BL/6J小鼠黑色素瘤，可以產(chǎn)生黑色素，同基因小鼠體內(nèi)移植可成瘤。

黑色素瘤，通常是指惡性黑色素瘤，是黑色素細(xì)胞來(lái)源的一種高度惡性的腫瘤，簡(jiǎn)稱(chēng)惡黑，多發(fā)生于皮膚，也可見(jiàn)于黏膜和內(nèi)臟，約占全部腫瘤的3%。

黑色素細(xì)胞是一種皮膚里的特殊的細(xì)胞，它產(chǎn)生黑色素，傳遞給周?chē)慕琴|(zhì)形成細(xì)胞。黑色素停留在這些角質(zhì)形成細(xì)胞的細(xì)胞核上起保護(hù)作用，防止染色體受到光線輻射受損。

黑色素細(xì)胞產(chǎn)生的黑色素防止陽(yáng)光對(duì)人體皮膚的輻射導(dǎo)致的細(xì)胞染色體受損。黑色素細(xì)胞能合成并分泌黑色素，因此是一種腺細(xì)胞。然而黑色素的生物合成非常復(fù)雜，是通過(guò)色體（未成熟的黑色素）內(nèi)酪氨酸—酪氨酸酶反應(yīng)形成的。

細(xì)胞處理方法：

1.細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至狀態(tài)良好后灌滿培養(yǎng)基運(yùn)輸，獲得細(xì)胞后用酒精棉球擦拭瓶口消毒，然后在超凈臺(tái)中操作。

2.如細(xì)胞生長(zhǎng)至70%-80%，將瓶中的培養(yǎng)基移入無(wú)菌瓶中留作培養(yǎng)使用，保留5-8mL培養(yǎng)基在37℃、5%的CO2的溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)至90%-100%后，按要求消化傳代。

3.棄去培養(yǎng)基，用無(wú)菌PBS或者其他緩沖液清洗細(xì)胞2次，加入適量胰蛋白酶消化（EDTA胰酶），待細(xì)胞完全脫壁后加培養(yǎng)基吹打混勻，分瓶培養(yǎng)。

應(yīng)用^[4][5]

用于湘西龍山百合對(duì)小鼠B-16黑色素瘤細(xì)胞黑色素含量、酪氨酸酶活性的影響研究

觀察不同濃度湘西龍山百合提取液對(duì)小鼠B-16細(xì)胞細(xì)胞活力、黑色素含量、酪氨酸酶活性的影響。

方法:選用同一傳代小鼠B-16黑色素瘤細(xì)胞并分組,分別加入百合提取液、維生素C（維生素C溶液稀釋成0.01,0.02,0.04,0.08g/L的濃度,根據(jù)所測(cè)定的百合提取液中維生素C含量按比例稀釋成4組濃度的百合溶液）2種溶液作用3天后,用MTT法測(cè)定B-16細(xì)胞活力;用Maeda等的方法測(cè)定B-16細(xì)胞酪氨酸酶活性;用Victoria等的方法測(cè)定B-16細(xì)胞黑色素含量。

結(jié)果:1.MTT法測(cè)定B-16細(xì)胞活力湘西龍山百合提取液、維生素C對(duì)小鼠B-16細(xì)胞的細(xì)胞活力抑制作用隨濃度的增加而增大,說(shuō)明百合提取液的細(xì)胞毒性作用強(qiáng)于維生素C,兩組各濃度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）,兩組組間計(jì)較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2. Maeda等的方法測(cè)酪氨酸酶活性湘西龍山百合提取液和維生素C對(duì)酪氨酸酶活性呈濃度依賴性抑制,兩組各濃度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;且百合提取液對(duì)酪氨酸酶活性的抑制作用強(qiáng)于維生素C,兩組組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3.Victoria等的方法測(cè)黑色素含量湘西龍山百合提取液和維生素C隨濃度的增加對(duì)細(xì)胞黑色素的合成的抑制率增加,百合提取液對(duì)黑色素合成抑制率優(yōu)于維生素C,百合提取液濃度在0.08g/L時(shí)對(duì)細(xì)胞合成的抑制率,兩組各濃度間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）,同濃度時(shí)兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

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