組織不應(yīng)直接置于液氮中，因?yàn)闇囟炔羁赡軙?huì)導(dǎo)致組織表面沸騰，從而導(dǎo)致氣穴和不均勻的冷凍這可能會(huì)破裂并在形態(tài)上破壞組織。如果您有異戊烷且純度足夠高的話，還是推薦您用異戊烷進(jìn)行組織冷凍的，具體方法如下：
b.將新鮮組織置于培養(yǎng)皿中，用干凈的紗布或者紙巾吸干組織周圍血水，盡量使組織表明干燥。
c.標(biāo)記冷凍模具以標(biāo)記組織的方向，用預(yù)冷的 OCT 填充模具，避免產(chǎn)生氣泡。
d.用鑷子將組織放入含預(yù)冷OCT的模具中，用OCT 覆蓋任何裸露組織的表面，確認(rèn)沒有氣泡，尤其是在組織附近。
e.用鑷子將模具放到異戊烷中，但不要使異戊烷浸入模具內(nèi)，直到組織凍結(jié)。冷凍時(shí)間可根據(jù)組織類型和大小而變化。
f.冷凍后，將組織轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的冷凍管中，然后放在干冰上。
g.將 OCT 包埋的組織塊保存在–80℃的密封容器中，以便長(zhǎng)期保存，或立即進(jìn)行冷凍切片
如果您的新鮮樣本打算直接進(jìn)行空間轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)，且實(shí)驗(yàn)室沒有異戊烷的話百邁客在這里給您推薦直接用干冰粉進(jìn)行組織冷凍包埋，具體方法如下：
b.將新鮮組織置于培養(yǎng)皿中，用干凈的紗布或者紙巾吸干組織周圍血水，盡量使組織表明干燥。
c.標(biāo)記冷凍模具以標(biāo)記組織的方向，用預(yù)冷的 OCT 填充模具，避免產(chǎn)生氣泡
d.用鑷子將組織放入含預(yù)冷OCT的模具中，用OCT 覆蓋任何裸露組織的表面，確認(rèn)沒有氣泡，尤其是在組織附近。
e.將組織放入干冰粉中，直到組織凍結(jié)。此方法冷凍包埋組織較慢，且須在干冰粉上靜置一段時(shí)間，確保組織冷凍均勻，約需30分鐘。
f.冷凍后，將組織轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的冷凍管中，然后放在干冰上。
g.將 OCT 包埋的組織塊保存在–80℃的密封容器中，以便長(zhǎng)期保存，或立即進(jìn)行冷凍切片。