背景^[1-3]

PERCP標(biāo)記小鼠抗人CD3單克隆抗體是一類可以特異性結(jié)合CD3的單克隆抗體，主要用于檢測CD3的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。

檢測原理：雙抗體夾心法測定標(biāo)本中CD3水平。用純化的CD3抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入CD3，再與HRP標(biāo)記的CD3抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的CD3呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中CD3濃度。

在免疫學(xué)中，CD3（分化簇3）T細(xì)胞的共受體是一種蛋白質(zhì)復(fù)合物，它由四個(gè)不同的鏈組成。在哺乳動物中，該復(fù)合物含有一個(gè)CD3γ鏈，CD3δ鏈，和2 CD3ε鏈。這些鏈具有被稱為一個(gè)分子副T細(xì)胞受體（TCR）和ζ-鏈以產(chǎn)生激活信號的T淋巴細(xì)胞。該TCR，ζ鏈和CD3分子一起構(gòu)成的T細(xì)胞受體復(fù)合物。

CD3分子是T細(xì)胞的重要標(biāo)志，由γ、δ、ε、ζ和η五種多肽鏈組成，它們的胞漿區(qū)均含有ITAM，具有傳導(dǎo)TCR信號的功能，使T細(xì)胞活化。CD3分子與TCR以非共價(jià)鍵結(jié)合形成TCR-CD3復(fù)合物，其主要功能是把TCR與抗原結(jié)合后產(chǎn)生的活化信號傳遞到細(xì)胞內(nèi)，誘導(dǎo)T細(xì)胞活化。

從外周血、骨髓或臍血中分離出的單個(gè)核細(xì)胞在CD3單克隆抗體和多種細(xì)胞因子存在的條件下，經(jīng)過一定時(shí)間培養(yǎng)可以獲得具有腫瘤細(xì)胞殺傷活性的CIK（Cytokine-induced Killer）細(xì)胞。

應(yīng)用^[4][5]

用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜淋巴細(xì)胞CD3、CD4、CD8的表達(dá)及意義研究

通過檢測類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者滑膜組織中淋巴細(xì)胞CD3、CD4、CD8的表達(dá)及分布狀況,探討其在RA發(fā)病中的作用。

方法：收集病理學(xué)確診為RA的手術(shù)切除滑膜組織標(biāo)本40例。另外選取10例骨性關(guān)節(jié)炎(OA)滑膜組織作為對照組。選取的組織蠟塊做41μm的連續(xù)切片,采用免疫組織化學(xué)方法,分別檢測RA組及OA組中多克隆兔抗人CD3抗體、小鼠抗人CD4單抗、小鼠抗人CD8單抗的表達(dá)狀況。

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料用(x±s)表示,數(shù)據(jù)比較用配對或獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)α值規(guī)定為0.05。

結(jié)果：所有RA病例的滑膜組織中均顯示中等量或大量淋巴細(xì)胞浸潤,92.5%(37/40)的病例出現(xiàn)淋巴細(xì)胞灶性聚集,甚至出現(xiàn)生發(fā)中心,形成淋巴濾泡樣結(jié)構(gòu)。

CD3在RA滑膜組織中高表達(dá),而在OA滑膜組織中低表達(dá),CD3+淋巴細(xì)胞在RA組中數(shù)量顯著高于OA組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(P<0.05)；

浸潤的淋巴細(xì)胞中CD3表達(dá)陽性的淋巴細(xì)胞約占淋巴細(xì)胞總數(shù)的72%；CD4在RA滑膜組織中高表達(dá),而在OA滑膜組織中低表達(dá),CD4+淋巴細(xì)胞在RA組中數(shù)量顯著高于OA組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；

CD8在RA滑膜組織中高表達(dá),而在OA滑膜組織中低表達(dá),CD8+淋巴細(xì)胞在RA組中數(shù)量顯著高于OA組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；

參考文獻(xiàn)

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[2]Differentiation of Effector CD4 T Cell Populations*[J].Jinfang Zhu,Hidehiro Yamane,William E.Paul.Annual Review of Immunology.2010

[3]Anti-TNF immunotherapy reduces CD8^sup+^T cell-mediated antimicrobial activity against Mycobacterium tuberculosis in humans[J].Bruns,Heiko,Meinken,Christoph,Schauenberg,Philipp,H?rter,Georg,Kern,Peter,Modlin,Robert L,Antoni,Christian,Stenger,Steffen.Journal of Clinical Investigation.2009(5)

[4]Altered T-cell subtypes in spondyloarthritis,rheumatoid arthritis and polymyalgia rheumatica[J].Christian Dejaco,Christina Duftner,Andrea Klauser,Michael Schirmer.Rheumatology International.2010(3)

[5]王艷霞.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜淋巴細(xì)胞CD3、CD4、CD8的表達(dá)及意義[D].天津醫(yī)科大學(xué),2012.