背景[1-3]
一氧化氮合成酶-1抗體(神經(jīng)型)是可以特異性結(jié)合一氧化氮合成酶-1的一類多克隆抗體，主要用于檢測一氧化氮合成酶-1的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。
檢測原理：雙抗體夾心法測定標(biāo)本中一氧化氮合成酶-1水平。用純化的一氧化氮合成酶-1抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入一氧化氮合成酶-1，再與HRP標(biāo)記的一氧化氮合成酶-1抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的一氧化氮合成酶-1呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中一氧化氮合成酶-1濃度。
一氧化氮合酶（NOS）是一種同工酶，分別存在于內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、神經(jīng)吞噬細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞中。一氧化氮合酶存在于神經(jīng)元中，在不同腦區(qū)呈選擇性分布。因?yàn)橐谎趸懿环€(wěn)定，因而研究生成一氧化氮的酶似乎更容易些，特別是一氧化氮合酶拮抗劑的發(fā)現(xiàn)，大大促進(jìn)了一些一氧化氮功能的研究。
一氧化氮合酶屬于神經(jīng)系統(tǒng)，其同功酶有三種亞型，即在正常狀態(tài)下表達(dá)的神經(jīng)元型一氧化氮合酶（nNOS）和內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）以及在損傷后誘導(dǎo)表達(dá)的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）。來源于誘導(dǎo)型一氧化氮合酶和神經(jīng)元型一氧化氮合酶的一氧化氮有神經(jīng)毒性作用，來源于內(nèi)皮型一氧化氮合酶的一氧化氮有神經(jīng)保護(hù)作用。
應(yīng)用[4][5]
用于載脂蛋白E與蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦組織中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶表達(dá)的關(guān)系研究
載脂蛋白E（apolipoprotein E,apoE）與蛛網(wǎng)膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）后腦組織中內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothclialnitric oxide synthase，eNOS）表達(dá)的相關(guān)性，為臨床防治SAH后腦血管痙攣提供新的治療思路。
方法采用枕大池注血法構(gòu)建小鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型；將30只apoE基因敲除（apoE KO）鼠和30只apoE基因野生（apoE WT）鼠均隨機(jī)抽簽分為對照組、蛛血組、干預(yù)組（n=10）；對照組為枕大池注射40ul的生理鹽水，蛛血組為枕大池注射40ul自體尾動(dòng)脈血，干預(yù)組為在枕大池注血前6周，每天胃內(nèi)灌注促進(jìn)apoE蛋白表達(dá)的肝X受體激動(dòng)劑T090131710mg/(kg.d)；
RT-PCR和Western blot法分別檢測術(shù)后12h各組腦組織中eNOS的mRNA和蛋白表達(dá)情況。結(jié)果對照組apoE KO鼠及apoE WT鼠eNOS的mRNA[(0.811±0.015)vs(0.823±0.021)]和蛋白[(0.902±0.038)vs(0.875±0.041)]之間的表達(dá)無明顯差異（P＞0.05）；與對照組相比，蛛血組eNOS的mRNA和蛋白表達(dá)明顯降低，且蛛血組內(nèi)apoE KO鼠eNOS的mRNA[(0.411±0.022)vs(0.613±0.036)]和蛋白[(0.578±0.061)vs(0.694±0.026)]表達(dá)較apoE WT鼠降低（P＜0.05）；
與apoE WT蛛血組相比，apoE WT干預(yù)組eNOS的mRNA[(0.766±0.052)vs(0.613±0.036)]和蛋白[(0.775±0.062)vs(0.694±0.026)]表達(dá)明顯增加（P＜0.05），但apoE KO干預(yù)組eNOS的表達(dá)與apoE KO蛛血組相比無明顯差異（P＞0.05）。
結(jié)論apoE與SAH后腦組織中eNOS的表達(dá)具有相關(guān)性；增加腦組織中apoE的表達(dá)能明顯促進(jìn)eNOS的表達(dá)增加，對防治SAH后腦血管痙攣的發(fā)生具有重要意義。
參考文獻(xiàn)
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[2]The Relationship Between Rebleeding After Spontaneous SAH and APOE Polymorphisms in a Chinese Population[J].Cheng Yin,Jian Ruan,Li Jiang,Shuai Zhou,Xiaochuan Sun.International Journal of Neuroscience.2012(8)
[3]Proteomic Biomarker Discovery in Cerebrospinal Fluid for Cerebral Vasospasm Following Subarachnoid Hemorrhage[J].Shivanand P.Lad,Harald Hegen,Gaurav Gupta,Florian Deisenhammer,Gary K.Steinberg.Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases.2012(1)
[4]Mechanical injured neurons stimulate astrocytes to express apolipoprotein E through ERK pathway[J].Cheng Yin,Shuai Zhou,Li Jiang,Xiaochuan Sun.Neuroscience Letters.2012(1)
[5]曾春.載脂蛋白E與蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦組織中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶表達(dá)的關(guān)系研究[D].重慶醫(yī)科大學(xué),2013.