背景[1-3]
ATP酶2C2抗體是可以特異性結(jié)合ATP酶2C2的一類(lèi)多克隆抗體。ATP酶2C2抗體是以源自人SPCA2的KLH共軛合成肽免疫無(wú)菌動(dòng)物后在其血清中純化制得的IgG。P型Ca2+轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶家族由三個(gè)亞科組成：肌漿膜（內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）Ca2+ATPase（SERCA），質(zhì)膜Ca2+ATPase（PMCA）和分泌途徑Ca2+ATPase（SPCA）。SPCA1蛋白（由ATP2C1基因編碼）是Ca2+/Mn2+-轉(zhuǎn)運(yùn)ATPase。它定位于高爾基體，并且與ATP酶2C2抗體SERCA2一起負(fù)責(zé)高爾基體腔中的離子環(huán)境。SPCA2（由ATP2C2基因編碼）也位于高爾基體，并且比SPCA1具有更高的酶轉(zhuǎn)化率，同時(shí)對(duì)胞質(zhì)Ca2+具有高親和力。人SPCA2酶ATP酶2C2抗體的酶學(xué)性質(zhì)并將其組織表達(dá)限制在胃腸道和呼吸道，前列腺，甲狀腺，唾液和乳腺，原則上可以定義在分泌細(xì)胞中具有特定生理作用的Ca2+-ATPase泵。
應(yīng)用[4][5]
用于β-catenin通過(guò)鈉/鉀ATP酶的α2亞單位調(diào)節(jié)骨骼肌細(xì)胞的靜息膜電位研究
β-catenin胞漿蛋白是Wnt經(jīng)典信號(hào)通路的一個(gè)重要下游分子,它在各系統(tǒng)組織中作用廣泛β-catenin已經(jīng)被證實(shí)在神經(jīng)肌肉接頭(neuromuscular junction,NMJ)形成中起著重要作用。而骨骼肌而并非突觸前神經(jīng)元的B-catenin在NMJ中作用尤為重要。獲取HSA-β-cat-/-敲除小鼠,檢測(cè)其和同窩對(duì)照小鼠骨骼肌細(xì)胞的電生理差異,并結(jié)合體外用靶向β-catenin的小片段干擾RNAs(β-catenin siRNAs)轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的小鼠成肌纖維細(xì)胞(C2C12)的方法進(jìn)一步證實(shí)這種差異,從而來(lái)探討骨骼肌β-catenin缺失后小鼠致死的可能原因和引起RMP去極化的可能機(jī)制,并進(jìn)一步為β-catenin在NMJ發(fā)育中的作用研究提供補(bǔ)充證據(jù)和新的思路。
方法：
1.實(shí)驗(yàn)分組：1)HSA-B-cat-/-敲除PO小鼠組和同窩β-catloxp/loxpP0小鼠對(duì)照組,各4-6只；2)分別轉(zhuǎn)染了β-catenin siRNA259sβ-catenin siRNA577、β-catenin siRNA1312的三組C2C12細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組和轉(zhuǎn)染了scrambled siRNA的C2C12細(xì)胞作為對(duì)照組；
2.實(shí)驗(yàn)方法：雜交小鼠獲取敲除組和實(shí)驗(yàn)組小鼠,分別對(duì)各組小鼠膈肌、腓腸肌、趾長(zhǎng)伸肌進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)記錄；轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞,對(duì)各組進(jìn)行全細(xì)胞記錄；Western blot法檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染后C2C12細(xì)胞和各組小鼠肌肉中鈉/鉀ATP酶(Na,K-ATPase)a2亞單位(a2NKA)、Na,K-ATPase的a1亞單位(alNKA)、Kv3.4蛋白的表達(dá)；實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-PCR檢測(cè)兩組小鼠肌肉中a2NKAmRNA的水平。
參考文獻(xiàn)
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