背景及概述^[1][2]

葡聚糖凝膠G-75呈白色微球狀，多孔凝膠類型；結構成分：交聯(lián)右旋糖酐；粒徑： 40-120µm；工作PH值：2-10。葡聚糖凝膠G-75是一種分離試劑，層析介質。應用：利用分子篩作用，進行多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定。操作溫度：4-40℃；球蛋白分離范圍：3000-80000。

化學穩(wěn)定性^[2]

葡聚糖凝膠G-75不溶于一切溶劑(除非它被化學降解)。 它在水、鹽溶液、有機溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的，在強酸中凝膠骨架的糖昔鍵被水解。 長期接觸氧化劑將破壞凝膠，因而應避免使用。

物理穩(wěn)定性^[2]

葡聚糖凝膠G-75并不熔融，可以在濕態(tài)、中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質。 干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。葡聚糖凝膠的機械強度取決于交聯(lián)度。

應用^[1]

CN99116406.7公開了蘄蛇酶及其生產工藝，工藝為凍干蛇毒用已知的緩沖液溶解上葡聚糖凝膠G-75柱過濾,收集具有凝血酶樣酶活力的A、B峰,用DEAE-葡聚糖凝膠A-50柱層析，收集具有凝血酶樣酶活力的V、VI、VII峰，用CM-葡聚糖凝膠C-50柱層析，收集具有凝血酶樣酶活力的CM1、CM2、CM3峰，用superdex75PG柱過濾，各得a，b兩峰，收集具有高凝血酶樣酶活力的b峰，混合為分子量24000~30000道爾頓及等電點4.5~5.0的蘄蛇酶。

使用方法^[2]

1. 葡聚糖凝膠預處理：

在室溫下，將葡聚糖凝膠干粉浸泡于蒸餾水中至少24小時，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，或者用熱水浸泡（不建議煮沸）至少1小時直至充分溶脹，凝膠體積不再變化。

注：在溶脹前，加入蒸餾水攪拌后使其自然沉降，沉降后若上層溶液中漂浮的凝膠碎片顆粒較多，需要重復多次漂洗將其除去，防止層析時阻塞凝膠柱，影響流速。

2. 裝柱：

將溶脹好的凝膠根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內，注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內產生氣泡或斷層; 裝柱要均勻，可在凝膠耐受的操作壓下裝柱，裝好的凝膠柱可以檢測柱效，檢測過濾柱裝填是否合格。

凝膠層析分離度取決于柱高，為分離不同組分，凝膠柱床必須有適宜的高度：分級分離時，一般需要 100cm 左右長的層析柱，柱高與直徑之比為 20:1-100:1，柱高過高時，凝膠擠壓變形阻塞會引起較大的反壓，應當盡可能避免；分組分離（例如脫鹽）時用短柱，柱高控制在40-50cm 以下，柱高與直徑的比約為 5:1-10:1。

3. 平衡：

上樣前用平衡液平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；

4. 上樣：

分級分離時上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積。

樣品溶液如有雜質或沉淀應過濾或離心除去，樣品的粘度不能過高，否則影響分離效果。

5. 洗脫方法:

可以用無鹽水，也可以采用上柱時的緩沖液洗脫；在上柱緩沖液中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以完全分離純化；

6. 在位清洗(CIP)

凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。 方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向清洗四個柱體積，再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

7. 保存

凝膠柱暫時不用，可將其回收，一般方法是將凝膠用水沖洗干凈濾干，可加入0.02%疊氮化鈉防腐或用20%乙醇浸泡，以控制微生物生長。

主要參考資料

[1] CN99116406.7蘄蛇酶及其生產工藝

[2] 葡聚糖凝膠G-75產品介紹