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DNAERASER基因組DNA污染清除劑的用途

2020/1/6 11:54:47

概述[1]

很多用戶在提取RNA的時候由于操作因素或者RNA抽提試劑質(zhì)量問題,造成所得到的RNA樣品中混雜基因組污染,在普通或者變性電泳的時候直接肉眼可見程度不一的DNA污染雜帶。即使用市售的RNase-free的DNase消化DNA也不容易清除完全,而且常常導(dǎo)致RNA降解。DNAeraser 基因組DNA污染清除劑不含DNA酶,在強烈抑制RNA酶的條件下徹底清除RNA樣品中的污染DNA雜帶和蛋白質(zhì)污染,同時進(jìn)一步純化RNA。最后通過異丙醇沉淀回收的RNA純度極高,完全不影響原有RNA質(zhì)量和下游應(yīng)用。

用途[1]

非酶法清除RNA樣品中的基因組DNA污染。每ml試劑處理~100μg RNA樣品。

操作步驟[1]

根據(jù)起始RNA溶液的體積,按比例加入所需試劑。以下操作以100μlRNA溶液為例。除非RNA溶液中RNA濃度很低,為方便操作可用DEPC處理水將不足100μl的RNA樣品的體積補充到100μl。

1.每100μlRNA溶液加入1ml基因組DNA污染清除試劑。充分振蕩混勻,冰上放置1分鐘。

2.加入自備的氯仿200μl,充分振蕩混勻,冰上放置1分鐘。

3.12000rpm低溫離心10分鐘。

4.取上清約600μl轉(zhuǎn)移到新管。應(yīng)留下少量上清勿觸動中間相,否則重新離心。

5.可選步驟:加入核酸助沉劑AcrylCarrier(目錄號:RN17)2μl,充分混勻。加入核酸助沉劑后RNA特別是低濃度RNA的回收率顯著增加,并使RNA沉淀容易辨認(rèn)。核酸助沉劑不影響RNA及其下游實驗。如果原樣品的RNA濃度較高,可以省略此步驟。

6.加等體積的異丙醇,充分混勻,室溫放置5-10分鐘。

7.12000rpm低溫離心10分鐘。棄上清。

8.加1ml75%乙醇,振蕩洗滌沉淀。12000rpm低溫離心3分鐘。棄盡上清。

9.敞開管口,空氣干燥RNA沉淀(注意不要干燥過頭,否則RNA沉淀極難溶解,但是也不能殘留太多乙醇,否則抑制下游反應(yīng))。

10.加入適量RNasefreewater或者DEPC處理水溶解RNA沉淀。1%普通瓊脂糖凝膠電泳檢查RNA。

主要參考文獻(xiàn)

[1] 侯俊玲,駱學(xué)農(nóng),鄭亞東,張少華,才學(xué)鵬。豬帶絳蟲Wnt基因家族在不同發(fā)育階段的qPCR分析?!吨袊鴦游飳W(xué)會寄生蟲學(xué)專業(yè)委員會第十屆全國寄生蟲學(xué)青年工作者學(xué)術(shù)研討會論文摘要集》2016年

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