367-93-1
中文名稱
異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷
英文名稱
Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside
CAS
367-93-1
EINECS 編號
206-703-0
分子式
C9H18O5S
MDL 編號
MFCD00063273
分子量
238.3
MOL 文件
367-93-1.mol
更新日期
2025/01/10 09:49:59
367-93-1 結(jié)構(gòu)式
基本信息
中文別名
異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖甙異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷
異丙基-beta-D-硫代半乳糖苷
1-甲基乙基-β-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷
異丙基-&SZLIG
-D-硫代半乳糖苷
異丙基-β-D-硫代半乳糖苷
異丙基-BETA-D-硫代乳吡喃糖苷(IPTG)
異丙基硫代-Β-D-半乳糖苷(IPTG)
異丙基-Β-D-硫代半乳糖苷(簡稱IPTG)
異丙基-Β-D-硫代半乳糖苷, DIOXANE-FREE
英文別名
1-ISOPROPYL-BETA-D-1-THIOGALACTO PYRANOSIDE1-ISOPROPYL-BETA-D-THIOGALACTOPYRANOSIDE
ANIMAL-FREE ORIGIN D-GALACTOSE
IPTG
IPTG, HEMIDIOXANE ADDUCT
ISOPROPYL-1-THIO-BETA-D-GALACTOPYRANOSIDE
ISOPROPYL-B-D-THIOGALACTOPYRANOSIDE
ISOPROPYL BETA-D-1-THIOGALACTOPYRANOSIDE
ISOPROPYL-BETA-D(-)-THIOGALACTOPYRANOSIDE
ISOPROPYL-BETA-D-THIOGALACTOPYRANOSIDE
ISOPROPYL-BETA-D-THIOGALACTOPYRANOSIDE, DIOXANE FREE
ISOPROPYL-BETA-D-THIOGALACTOPYRANOSIDE, HEMIDIOXANE ADDUCT
ISOPROPYL-BETA-D-THIOGALACTOSIDE
ISOPROPYLTHIO-BETA-GALACTOSIDE
ISOPROPYLTHIO-BETA-THIOGALACTOSIDASE
ISOPROPYLTHIO-B-THIOGALACTOPYRANOSIDE
ISOPROPYL THIOGALACTOSIDE
1-methylethyl1-thio-.beta.-D-Galactopyranoside
1-methylethyl1-thio-beta-d-galactopyranosid
isopropyl-thiogalactopyranoside
物理化學(xué)性質(zhì)
外觀性質(zhì)白色粉末。易溶于水、甲醇、乙醇，可溶于丙酮、氯仿，不溶于乙醚。是β-半乳糖苷酶和β-半乳糖透酶的誘導(dǎo)劑，不被β-半乳糖苷水解，是硫代半乳糖轉(zhuǎn)酰酶的底物熔點(diǎn):109.5～110.5℃
熔點(diǎn)105 °C
比旋光度-31 º (c=1, water)
沸點(diǎn)350.9°C (rough estimate)
密度1.3329 (rough estimate)
折射率1.5060 (estimate)
儲存條件−20°C
溶解度溶于水或甲醇。
酸度系數(shù)(pKa)13.00±0.70(Predicted)
形態(tài)結(jié)晶粉末
顏色白色
水溶解性可溶于水
Merck5082
BRN4631
穩(wěn)定性穩(wěn)定的。與強(qiáng)氧化劑不相容。
InChIKeyBPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N
CAS 數(shù)據(jù)庫367-93-1(CAS DataBase Reference)
存儲注意事項濕度敏感
EPA化學(xué)物質(zhì)信息Isopropyl .beta.- thiogalactoside (367-93-1)
安全數(shù)據(jù)
常見問題列表
概述
異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實(shí)驗室廣泛應(yīng)用。IPTG 常用于需要誘導(dǎo) β-半乳糖苷酶活性的克隆實(shí)驗。它常與 X-Gal 或 Bluo-Gal 結(jié)合使用，用于重組細(xì)菌菌落的藍(lán)白篩選，這些菌落可以誘導(dǎo) lac 操縱子在大腸桿菌中的表達(dá)。IPTG 與 lacI 阻遏蛋白結(jié)合并改變其構(gòu)象而發(fā)揮作用，防止 β-半乳糖苷酶編碼基因 lacZ 的抑制。誘導(dǎo)原理
E.coli的乳糖操縱子（元）含Z、Y及A三個結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙?；D(zhuǎn)移酶，此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調(diào)節(jié) 基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白，后者與O序列結(jié)合，使操縱子（元）受阻遏而處于關(guān)閉狀態(tài)。在啟動序列P上游還有一個分解（代謝）物基因激 活蛋白（CAP）結(jié)合位點(diǎn)。由P序列、O序列和CAP結(jié)合位點(diǎn)共同構(gòu)成lac操縱子的調(diào)控區(qū)，三個酶的編碼基因即由同一調(diào)控區(qū)調(diào)節(jié)，實(shí)現(xiàn)基因產(chǎn)物的協(xié)調(diào)表達(dá) 。在沒有乳糖存在時，lac操縱子（元）處于阻遏狀態(tài)。此時，I序列在PI啟動序列操縱下表達(dá)的Lac阻遏蛋白與O序列結(jié)合，阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié) 合，抑制轉(zhuǎn)錄起動。當(dāng)有乳糖存在時，lac操縱子（元）即可被誘導(dǎo)。在這個操縱子（元）體系中，真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖進(jìn)入細(xì)胞，經(jīng)β-半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)楫惾樘?。后者作為一種誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白，使蛋白構(gòu)象變化，導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的作用與異乳糖相同，是一 種作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實(shí)驗室廣泛應(yīng)用。
IPTG的優(yōu)點(diǎn)
1.能誘導(dǎo)酶的合成，但又不被分解的分子，稱為安慰誘導(dǎo)物。由于乳糖雖可誘導(dǎo)酶的合成，但又隨之分解，產(chǎn)生很多復(fù)雜的動力學(xué)問題，因此人們常用安慰誘導(dǎo)物來進(jìn)行各種實(shí)驗。2.IPTG不被菌體代謝，為乳糖類似物，一旦進(jìn)入細(xì)胞就會產(chǎn)生持續(xù)長久的誘導(dǎo)效果，所以IPTG的誘導(dǎo)效率高，往往只需要很少量(1mmol/L)即可達(dá)到理想誘導(dǎo)效果。由于IPTG不被代謝，在胞內(nèi)專一誘導(dǎo)外源蛋白的表達(dá)。不受細(xì)胞代謝的影響，誘導(dǎo)效果持續(xù)穩(wěn)定。乳糖有雙效作用，既能做為誘導(dǎo)劑異乳糖的前體物質(zhì)，又可以做碳源，在誘導(dǎo)過程中，很不穩(wěn)定，IPTG因其優(yōu)異的穩(wěn)定性決定了它適合做實(shí)驗研究用。
3.IPTG能在缺乏lacY基因下而有效地被抄送。
4.半乳糖苷鍵中用硫代替了氧，失去了水解活性，但硫代半乳糖苷和同源的氧代化合物與酶位點(diǎn)的親和力相同，IPTG雖不為β–半乳糖苷酶所識別，但它是lac基因簇十分有效的誘導(dǎo)物。
使用方法：首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液，并進(jìn)行過濾除菌后保存。然后在100 ml的瓊脂培養(yǎng)基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml)，制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養(yǎng)基。當(dāng)dna片段插入至pUC系列載體(或其他帶有l(wèi)acZ、Amp基因載體)，然后轉(zhuǎn)化至lacZ缺失細(xì)胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養(yǎng)基，可根據(jù)長出菌體的藍(lán)白色，而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。
實(shí)驗材料的準(zhǔn)備
1、誘導(dǎo)表達(dá)材料：( 1 ) LB (Luria—Bertani))培養(yǎng)基：
酵母膏 (Yeast extract) 5g 蛋白胨 (Peptone) 10g
NaCl 10g 瓊脂 (Agar) 1-2%
蒸餾水 (Distilled water) 1000ml pH 7.0
適用范圍：大腸桿菌
( 2 ) IPTG 貯備液：
2 g IPTG溶于10 mL 蒸餾水中,0 . 22 μm 濾膜過濾除菌,分裝成1 mL /份,-20 ℃ 保存.
( 3 ) l× 凝膠電泳加樣緩沖液：
50 mmol / L Tris -CI ( pH 6 . 8 )
50 mmol / L DTT
2 % SDS (電泳級)
0.1 % 溴酚藍(lán)
10 % 甘油
2、大腸桿菌包涵體的分離與蛋白純化材料：
1 )酶溶法
(1)裂解緩沖液：
50 mmol / L Tris-CI ( pH 8 . 0 )
1 mmol / L EDTA
100 mmol / LNaCI
(2)50 mmol / L 苯甲基磺酰氟(PMSF ).
(3)10 mg / mL 溶菌酶.
(4)脫氧膽酸.
(5)1 mg / mL DNase I.
2 )超聲破碎法
( 1 ) TE 緩沖液.
( 2 ) 2×SDS -PAGE 凝膠電泳加樣緩沖液：
100 mmol / L Tris-HCI ( pH 8 . 0 )
100 mmol / L DTT
4 %SDS
0.2 % 溴酚藍(lán)
20 % 甘油
實(shí)驗方案
1、外源基因的誘導(dǎo)表達(dá)：(1)用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切核酸酶消化載體DNA 和目的基因.
( 2 )按連接步驟連接目的基因和載體,并轉(zhuǎn)化到相應(yīng)的宿主菌.
( 3 )篩選出含重組子的轉(zhuǎn)化菌落,提取質(zhì)粒DNA 作限制性內(nèi)切核酸酶圖譜,DNA 序列測定,
確定無誤后進(jìn)行下一步.
( 4 )如果表達(dá)載體的原核啟動子為PL 啟動子,則在30 -32 ℃ 培養(yǎng)數(shù)小時,使培養(yǎng)液的OD600達(dá)0.4-0.6 ,迅速使溫度升至42 ℃ 繼續(xù)培養(yǎng)3 -5h ;如果表達(dá)載體的原核啟動子為tac 等,則37 ℃培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)小時達(dá)到對數(shù)生長期后加IPTG 至終濃度為1 mmol / L.繼續(xù)培養(yǎng)3 -5h .
( 5 )取上述培養(yǎng)液1 mL , 1000g 離心,1 min ,沉淀,加100 μL 聚丙烯酰胺凝膠電泳上樣緩沖液后,作SDS -PAGE 檢測.
2、大腸桿菌包涵體的分離與蛋白質(zhì)純化：
細(xì)菌的裂解
常用方法有：① 高溫珠磨法;② 高壓勻漿;③ 超聲破碎法;④ 酶溶法;⑤ 化學(xué)滲透等.前三種方法屬機(jī)械破碎法,并且方法① 、② 已在工業(yè)生產(chǎn)中得到應(yīng)用,后三種方法在實(shí)驗室研究中應(yīng)用較為廣泛.下面介紹酶溶法和超聲破碎法的實(shí)驗步驟.
酶溶法.常用的溶解酶有溶菌酶;β-1,3 -葡聚糖酶;β-1,6 -葡聚糖酶;蛋白酶;殼多糖酶;糖昔酶等.溶菌酶主要對細(xì)菌類有作用,而其他幾種酶對酵母作用顯著.主要步驟為：
4 ℃ ,5000rpm 離心,15 min ,收集誘導(dǎo)表達(dá)的細(xì)菌培養(yǎng)液(100 mL ).棄上清,約每克濕菌加3 mL 裂解緩沖液,懸浮沉淀.
知名試劑公司產(chǎn)品信息
Acros Organics
異丙基-beta-d-硫代乳吡喃糖苷(IPTG)Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside, contains ca. 15% 1,4-Dioxane, for biochemistry, 99+%(367-93-1)
Alfa Aesar
異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,dioxane-free,99%Isopropyl-beta-D-thiogalactoside, dioxane-free, 99%(367-93-1)
Sigma Aldrich
367-93-1(sigmaaldrich)異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷價格(試劑級)
| 報價日期 | 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | CAS號 | 包裝 | 價格 |
| 2024/11/08 | BP1755 | 異丙基硫代-β-D-半乳糖苷 Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG) (Dioxane-free), Fisher BioReagents™ | 367-93-1 | 10g | 892元 |
| 2024/11/08 | BP1755 | 異丙基硫代-β-D-半乳糖苷 Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG) (Dioxane-free), Fisher BioReagents™ | 367-93-1 | 100g | 6656元 |
| 2024/11/08 | B21149 | 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 不含二氧六環(huán), 99% Isopropyl-beta-D-thiogalactoside, dioxane-free, 99% | 367-93-1 | 1g | 911元 |