"ND7/23 epithelioid cells鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系

細(xì)胞背景資料：神經(jīng)母細(xì)胞瘤

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項(xiàng)：１.取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套，護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要，細(xì)胞凍存管可能漏入液氮，解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致爆炸。２.凍存液的問題：凍存液的配置已是常識(shí)，在這里不作詳述，但二甲基亞砜(DMSO )對(duì)細(xì)胞不是完全無毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞的毒副作較大，因此，必須在１-２min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢，會(huì)造成細(xì)胞的損傷，二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。３.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度，以減少對(duì)細(xì)胞的損傷。４.離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè)，去除DMSO，去除死細(xì)胞，這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程，但對(duì)一般人來說，把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間，轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少，細(xì)胞就全被扔掉了，轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會(huì)受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO)，DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇，結(jié)果無異常。５.細(xì)胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時(shí)１ml細(xì)胞液要加１０ml-１５ml培養(yǎng)液，而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附。６.復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題：試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇１管細(xì)胞一般可分裝到１-２只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細(xì)胞濃度過低，不利于細(xì)胞的貼壁。７.加培養(yǎng)基的量放入問題：這個(gè)量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會(huì)比較大，就會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于０.５%的時(shí)候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響，還有一個(gè)說法是１%。所以如果你的凍存液的濃度是１０%DMSO的話那么加１０ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。

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細(xì)胞生長(zhǎng)：貼壁

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細(xì)胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)

冷凍細(xì)胞解凍程序：依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單指定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它指定之成份和比例，制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類，若因?qū)嶒?yàn)需要，必須有所不同時(shí)，務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行所需之實(shí)驗(yàn)。FBS(fetal bovine serum,胚牛血清), CS(calf serum,小牛血清)和HS(horse serum,馬血清)，對(duì)細(xì)胞而言差異極大，請(qǐng)務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單指定之血清種類培養(yǎng)之。將培養(yǎng)基置于３７°C水槽中回溫，回溫后噴以７０%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。取出冷凍管，立即放入３７°C水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在１分鐘內(nèi)全部融化后，以７０%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。依據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無菌操作臺(tái)內(nèi)?。保癿l培養(yǎng)基加至T２５或T７５flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入T２５或T７５flask內(nèi)之培養(yǎng)基，混合均勻，放入３７°C，５%CO２培養(yǎng)箱培養(yǎng)。對(duì)絕大多數(shù)細(xì)胞而言，１%以下之冷凍保護(hù)劑DMSO，不會(huì)對(duì)細(xì)胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍細(xì)胞中去除，待第二天確定細(xì)胞生長(zhǎng)或貼附良好后再去除即可。惟對(duì)極少數(shù)因?qū)MSO敏感或會(huì)造成細(xì)胞分化之細(xì)胞，需立即去除DMSO者，則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入５-１０ml培養(yǎng)基中，離心３００xg(約１０００rpm)，５分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養(yǎng)基，將細(xì)胞均勻混合后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，再放入３７°C，５%CO２培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

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細(xì)胞來源說明：細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系

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細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)特性：詳見細(xì)胞說明書

培養(yǎng)細(xì)胞真的不難，最關(guān)鍵幾點(diǎn)：１)所有的東西使用，如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進(jìn)口的，真的很難相信你會(huì)把細(xì)胞養(yǎng)壞；２)動(dòng)作要快，胰酶消化，換液什么，細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時(shí)間，所謂的細(xì)胞狀態(tài)差，很多時(shí)候是傳代的原因；３)有時(shí)間的話，需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，不會(huì)臨時(shí)要處理，手足無措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排時(shí)間，傳代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行，可以節(jié)省很多時(shí)間，也不會(huì)耽誤別人的實(shí)驗(yàn)；５)個(gè)人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套，不要和別人混用，最近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟；６)傳代細(xì)胞不能進(jìn)去太多人，避免相互干擾。每天對(duì)待細(xì)胞比孝敬爹媽還用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了，培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)有哪些經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)可以分享呢?１)嚴(yán)格無菌操作，多噴噴酒精，要是對(duì)滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和別人共用試劑耗材，自己準(zhǔn)備一套；３)有可能的話在拿到新細(xì)胞的時(shí)候做好支原體衣原體檢測(cè)；４)水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話盤里的水也會(huì)很臟，勤換(滅菌水加進(jìn)去)；５)晚上離開的時(shí)候給傳代細(xì)胞照紫外，超凈臺(tái)是用完就開；６)是同一時(shí)間就你一個(gè)人在用傳代細(xì)胞在養(yǎng)細(xì)胞。

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H-2198細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KMS-11細(xì)胞、NCCIT細(xì)胞、JJN-3細(xì)胞

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COLO-394細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H810細(xì)胞、T2 (174 x CEM.T2)細(xì)胞、NBL-12細(xì)胞

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MC3T3-L1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：C-Li-7細(xì)胞、BV2細(xì)胞、MES-SA-Dx5細(xì)胞

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CFPAC1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PJ34細(xì)胞、143B TK-細(xì)胞、G-402細(xì)胞

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RCC23細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：L 929細(xì)胞、BHK-21細(xì)胞、HCC-1438細(xì)胞

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細(xì)胞、Hs 888Lu細(xì)胞

MC/CAR細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：A-2058細(xì)胞、A 72細(xì)胞、WEHI 3B細(xì)胞

Lewis lung carcinoma細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Duck embryo細(xì)胞、293H細(xì)胞、WERI-Rb1細(xì)胞

HUT125細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MLE 12細(xì)胞、P3X63Ag8653細(xì)胞、32D clone3細(xì)胞

PC12(高分化)細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：Oregon J-111細(xì)胞、HO-1-N-1細(xì)胞、PC3細(xì)胞

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NCIH727細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-N87細(xì)胞、TN5B14細(xì)胞、SW1573細(xì)胞

NB19-RIKEN細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MODE-K細(xì)胞、NCI-H2342細(xì)胞、IPEC-J2細(xì)胞

HEK293-EBNA1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：16HBE細(xì)胞、M21細(xì)胞、IPECJ2細(xì)胞

Mouse Colon 38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：KTC1細(xì)胞、SNU-484細(xì)胞、MDA-231細(xì)胞

SF295細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-2081細(xì)胞、Lu-165細(xì)胞、PK136細(xì)胞

COLO 206F細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：PLA 802細(xì)胞、CCD 966 SK細(xì)胞、Hi-five細(xì)胞

MGSMC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：WM 115細(xì)胞、Hs675細(xì)胞、16HBE14o-細(xì)胞

CHO/dhFr-細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDBK細(xì)胞、NOK細(xì)胞、HT 115細(xì)胞

KOSC2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：TALL-104細(xì)胞、SU-DHL2細(xì)胞、HGF-1細(xì)胞

Nb-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：C666-1細(xì)胞、SK MEL 5細(xì)胞、CL40細(xì)胞

V79-GalK1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM05372E細(xì)胞、NCIH322細(xì)胞、NCIH2196細(xì)胞

MT4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：B6Tert-1細(xì)胞、XWLC-05細(xì)胞、MRC-5細(xì)胞

VAESBJ細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品：ELD-1細(xì)胞、NCI-H322T細(xì)胞、MyLa2059細(xì)胞

ND7/23 epithelioid cells鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系

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