"RPMI-2650 epithelioid cells人鼻腔上皮細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:頭頸鱗癌;胸腔積液轉(zhuǎn)移;男性 細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣 細(xì)胞株(系)的使用,為醫(yī)學(xué)研究和測試工作帶來了極大的方便。但細(xì)胞的傳代是有限制的,長期連續(xù)傳代的細(xì)胞,不僅消耗大量的人力和物力,而且細(xì)胞的生長與形態(tài)等會有一定退變或轉(zhuǎn)化,因而細(xì)胞失去原有的遺傳特性,有時還會由于細(xì)胞污染而造成傳代中斷,種子丟失。因此,在實際工作中常需凍存一定數(shù)量的細(xì)胞,以備替換使用。細(xì)胞冷凍與復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng) 室的常規(guī)工作和通用技術(shù)。目前,細(xì)胞凍存最常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,主要采用加適量保護劑的緩慢冷凍法凍存細(xì)胞。細(xì)胞在不加任何保護劑的情況下直接冷凍,細(xì)胞內(nèi)外的水分會很快形成冰晶,從而引起一系列不良反應(yīng)。如細(xì)胞脫水使局部電解質(zhì)濃度增高,pH值改變,部分蛋白質(zhì)由于上述原因而變性,引起細(xì)胞內(nèi)部空間結(jié)構(gòu)紊亂,溶酶體膜由此遭到損傷而釋放出溶酶體酶,使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)成分造成破壞,線粒體腫脹,功能丟失,并造成能量代謝障礙。胞膜上的類脂蛋白復(fù)合體也易破壞引起細(xì)胞膜通透性的改變,使細(xì)胞內(nèi)容物丟失。如果細(xì)胞內(nèi)冰晶形成較多,隨冷凍溫度的降低,冰晶體積膨脹造成細(xì)胞核DNA空間構(gòu)型發(fā)生不可逆的損傷,而致細(xì)胞死亡。因此,細(xì)胞冷凍技術(shù)的關(guān)鍵是盡可能地減少細(xì)胞內(nèi)水分,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成。采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質(zhì)分子量小,溶解度大,易穿透細(xì)胞,可以使冰點下降,提高細(xì)胞膜對水的通透性,且對細(xì)胞無明顯毒性。慢速冷凍方法又可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少胞內(nèi)形成冰結(jié)晶的機會,從而減少冰晶對細(xì)胞的損傷。 D10G41細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUM-102細(xì)胞、AR4IP細(xì)胞、bEnd3細(xì)胞 H1703細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:DAKIKI Clone 1細(xì)胞、MDA1386細(xì)胞、CACO2細(xì)胞 CG-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Panc 4.03細(xì)胞、K562/ADP細(xì)胞、H647ell細(xì)胞 細(xì)胞生長:貼壁 RPMI-2650 epithelioid cells人鼻腔上皮細(xì)胞系 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞學(xué)在生命科學(xué)科中起著至關(guān)重要的作用,近年來細(xì)胞學(xué)蓬勃發(fā)展,并取得了重大的進展,細(xì)胞實驗室的構(gòu)建也是各個院校生物學(xué)科必備的實驗室。細(xì)胞實驗謹(jǐn)慎復(fù)雜,需要的實驗設(shè)備種類繁多,下面就一些動物細(xì)胞實驗室必備儀器進行簡單介紹:CO2培養(yǎng)箱是細(xì)胞培養(yǎng)的必備儀器,它為細(xì)胞提供了一個體外培養(yǎng)的舒適環(huán)境,如適宜的溫度、濕度、酸堿度、O2濃度等。細(xì)胞在體外培養(yǎng)時很容易受到各種細(xì)菌、微生物的感染,因此,CO2培養(yǎng)箱的滅菌和抑菌能力就顯得尤為重要。純水系統(tǒng):細(xì)胞培養(yǎng)用水一般要求雙蒸水,實際上普通蒸餾水經(jīng)玻璃器皿中按標(biāo)準(zhǔn)方法蒸餾二次得到的雙蒸水是不能滿足要求的,而且水中的內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡,血清中內(nèi)毒素含量越低,對細(xì)胞毒性越小,越利于細(xì)胞的生長和傳代;內(nèi)毒素含量過高,會直接導(dǎo)致細(xì)胞提前老化。因此建議配置正式的水純化系統(tǒng)。超凈工作臺/生物安全柜:細(xì)胞培養(yǎng)對無菌環(huán)境要求很高,在細(xì)胞操作時,一般需要在100級空氣質(zhì)量條件下進行,因此超凈工作臺或生物安全柜就必須配備。液氮罐:為了保存細(xì)胞,特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株,要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般為液氮溫度-196℃,因此,需要液氮罐。在此環(huán)境中,一般細(xì)胞可以保存十年具有活性。超低溫冰箱:細(xì)胞的凍存過程需要一系列程序降溫,一般4℃下存放30min,轉(zhuǎn)放-20℃ 1 hour,再轉(zhuǎn)入-70至-80℃過夜,之后才可以轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)(-196℃),這時就必須配備一臺-86℃超低溫冰箱。一般超低溫冰箱保存細(xì)胞可達(dá)數(shù)月,對于不需要長期凍存的細(xì)胞,可暫時放于超低溫冰箱保存。恒溫水?。簭囊旱虺蜏乇渲腥〕黾?xì)胞凍存管需要立即放于37℃水浴中快速復(fù)蘇之后才傳代培養(yǎng),因此,恒溫水浴也是細(xì)胞實驗室必備儀器。離心機:細(xì)胞培養(yǎng)需要離心收集傳代細(xì)胞,所以需要配置低速的常溫離心機,對于后期細(xì)胞內(nèi)容物的分離則需要高速冷凍離心機。移液器和細(xì)胞培養(yǎng)的大量耗材:細(xì)胞實驗中有大量頻繁的移液操作,因此各種微量移液器、瓶口分配器、移液管控制器是必不可少的。各類細(xì)胞培養(yǎng)板、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、移液管等耗材更是不可或缺的,而且一次性,用量極大。除上述儀器外,高壓滅菌鍋、倒置顯微鏡也是細(xì)胞培養(yǎng)的必備儀器,發(fā)酵罐、轉(zhuǎn)瓶機等也常常見于細(xì)胞培養(yǎng)實驗室。 細(xì)胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 WC00079細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:A549ATCC細(xì)胞、MKN74細(xì)胞、D 407細(xì)胞 TM-4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OAC-P4C細(xì)胞、HEC-1-B細(xì)胞、CCD966SK細(xì)胞 ONS-76細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:3D4/21細(xì)胞、SC細(xì)胞、KRC Y細(xì)胞 Capan1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-RC-20細(xì)胞、UWB1-289細(xì)胞、HRMC細(xì)胞 RC-2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HR-1細(xì)胞、HPDE細(xì)胞、OKT3細(xì)胞 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 RPMI-2650 epithelioid cells人鼻腔上皮細(xì)胞系 細(xì)胞生長特性:貼壁 細(xì)胞形態(tài)特性:詳見細(xì)胞說明書 購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,原因比較復(fù)雜,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳;血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳;解凍過程錯誤;冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心;懸渾細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞;培養(yǎng)溫度使用錯誤;細(xì)胞置于-80℃太久等。建議嚴(yán)格參照ATCC的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進行細(xì)胞復(fù)蘇、凍存等工作。欲將一般動物細(xì)胞離心下來,其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速?欲回收動物細(xì)胞,其離心速率一般為300×g(約1O(jiān)OOrpm),5-10分鐘,轉(zhuǎn)速過高或離心時間過長都將造成細(xì)胞死亡。合適的離心轉(zhuǎn)速是根據(jù)相對離心力決定。RCF=1.119×105×r×(rpm)2,其中r為離心機轉(zhuǎn)軸中心與離心套管底部內(nèi)壁的距離;rpm為離心機每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù);RCF(relative centrifugal force)為相對離心力,以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍數(shù)來表示單位。 CCD-966SK細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:P3X63Ag8653細(xì)胞、H-1836細(xì)胞、PJ34細(xì)胞 HT-55細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:BT-474細(xì)胞、NS1/1-Ag4.1細(xì)胞、HLEB-3細(xì)胞 L23/P細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:ETCC007細(xì)胞、Mink細(xì)胞、Primary Liver Carcinoma/Poliomyelitis Research Foundation/5細(xì)胞 Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-8細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:AGS細(xì)胞、P388.D1細(xì)胞、P3X63 AG8-653細(xì)胞 KPL-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM2219C細(xì)胞、WC00044細(xì)胞、Hs 940.T細(xì)胞 Renal Proximal Tubule Epithelial Cells/TERT-immortalized 1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H-69細(xì)胞、WI38細(xì)胞、H-292細(xì)胞 GBC-SD細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Alexander細(xì)胞、Hx-147細(xì)胞、PL5細(xì)胞 Wistar Institute-38細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:PK(15)細(xì)胞、WM115細(xì)胞、PC 61-5-3細(xì)胞 PAEC細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCT-8/V細(xì)胞、293/EBNA-1細(xì)胞、2B4-L細(xì)胞 NCIH64細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Colo-201細(xì)胞、HL-1細(xì)胞、HOP62細(xì)胞 RPMI-2650 epithelioid cells人鼻腔上皮細(xì)胞系 MDA MB 453細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:M-G63細(xì)胞、T47D:A細(xì)胞、C32-mel細(xì)胞 MDAMB231細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:MUTZ-1細(xì)胞、PANC-08-13細(xì)胞、H128細(xì)胞 SK-CO-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1734細(xì)胞、NCI-H1437細(xì)胞、CV 1細(xì)胞 FRhK4細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH508細(xì)胞、CCLP-1細(xì)胞、Tn 5B1-4細(xì)胞 SK Mel28細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:USMC細(xì)胞、KU 812F細(xì)胞、RWPE-2細(xì)胞 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