價格 | ¥790 |
包裝 | 10mL |
最小起訂量 | 10mL |
發(fā)貨地 | 上海 |
更新日期 | 2024-11-12 |
中文名稱:超級雜交液(原位雜交用) | 英文名稱:SuperHyb Solution for ISH |
保存條件: 常溫運輸和保存 | 純度規(guī)格: 99.9% |
產(chǎn)品類別: 分子生物試劑 探針標記及檢測 |
超級雜交液(原位雜交用)
產(chǎn)品及特點 原位雜交是在一定生物結構基礎之上的核酸雜交。這種結構基礎可以是一條染色體;一個細菌;更大結構基礎是細胞和組織。基本原理是兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,通過氫鍵結合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或NA-RNA 雙鍵分子,應用帶有標記的(有放射性同位素,如3H、35S、32P、熒光素生物素、地高辛等非放射性物質)DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細胞內待測核酸(RNA或DNA)片段進行雜交,然后可用放射自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位;用原位雜交技術,可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水平來探討細胞的功能表達及其調節(jié)機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。本產(chǎn)品為公司開發(fā)的即用型原位雜交專用核酸雜交液。既可以用于RNA原位雜交、DNA原位雜交,也可以用于FISH原位雜交等試驗。
超級雜交液(原位雜交用)運輸及保存 低溫運輸和-20℃保存、有效期一年。
自備試劑 蓋玻片、多聚甲醛等
使用方法 以檢測 mRNA 序列為例。培養(yǎng)細胞和冰凍切片
1. 玻片的處理:一般采用多聚賴氨酸或 APES。切片厚度 10-20μm。
2. 細胞在多聚賴氨酸處理的蓋玻片上進行培養(yǎng),條件為 37℃和 5%的 CO2,所用培養(yǎng)基為 Dulbecco 基礎培養(yǎng)基。細胞長好后 0.1M PBS(PH7.4)洗 2分鐘×3 次。
3. 培養(yǎng)細胞和冰凍切片均可用下述方法固定:固定液為 4%多聚甲醛/0.1 MPBS (PH7.2-7.6),含有 1/1000 DEPC。室溫固定 20--30 分鐘。蒸餾水充分洗滌,干燥后-20℃冰凍可保存 2 周以上。
4. 30%H2O2 1 份+純甲醇 50 份混合,室溫處理 30 分鐘。蒸餾水洗滌 3 次。
5. 暴露 mRNA 核酸片段:切片上滴加 3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml3% 檸檬酸加 2 滴濃縮型胃蛋白酶,混勻),37℃或室溫消化 5—120 秒鐘。有時也可以不消化。原位雜交用 PBS 洗 3 次×5 分鐘。蒸餾水洗 1 次。
6. 后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液為 1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有 1/1000 DEPC。室溫固定 10 分鐘。蒸餾水洗滌 3次。
7. 預雜交:濕盒的準備——干的雜交盒底部加 20%甘油 20ml 以保持濕度。按每張切片加 20μL 預雜交液(提前加入鮭魚精 DNA,終濃度為100ug/ml)。恒溫箱 38-42℃2—4 小時。吸取多余液體,不洗。
注:靶 DNA 的變性
DNA-DNA 雜交檢測中,在雜交前需要增加靶 DNA 的變性步驟(對 mRNA的原位雜交無需此步)。樣品 DNA 的變性可能會造成樣品形態(tài)學的部分破壞,此步是實驗中需要優(yōu)化的一個步驟。實驗時可以摸索變性時間、變性溫度等參數(shù)以獲得條件。可以將探針的變性和樣品 DNA 變性同步進行:將樣品和探針溶液加蓋蓋玻片,置于烘箱 80℃變性 ,處 理 5-10 min,后冷卻至 37℃進行雜交。
8. 雜交——按每張切片 20μL 雜交液(探針濃度約為 1ng/ul;雜交液提前加入鮭魚精 DNA,終濃度為 100ug/ml),加在切片上。將原位雜交專用蓋玻片的保護膜揭開后,蓋在切片上。恒溫箱 38-42℃雜交過夜(根據(jù)雜交情況可以調節(jié))。
9. 雜交后洗滌:揭掉蓋玻片,37℃左右水溫的 2×SSC 洗滌 5 分鐘×2 次;37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色,重復 0.2×SSC 洗滌 15 分鐘×1-2 次)。
10. 滴加封閉液:37℃30 分鐘。甩去多余液體,不洗。
11. 根據(jù)探針標記物,選擇相應顯色方法顯色、復染,脫水、封片。
12. 結果觀察。
石蠟切片
如果有條件的話,應盡可能地采用新鮮標本。標本離體后,及時予以固定。固定液為 4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有 1/1000 DEPC。標本較大時用刀片切成厚度不超過 4mm 的小塊,固定 1 小時即可,較大的標本固定不要超過 2 小時。某些組織對過度固定尤其敏感,如動物大腦,固定時間30-40 分鐘,一般不要超過 1 小時。
1.常規(guī)脫水、浸蠟、包埋。切片厚度 6-8μm。
2.玻片的處理:一般采用多聚賴氨酸或 APES。
3.石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟至水。30%H2O2 1 份+蒸餾水 10 份混合,室溫 5-10分鐘以滅活內源性酶。蒸餾水洗 3 次。
4.暴露 mRNA 核酸片段:切片上滴加 3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml3% 檸檬酸加 2 滴濃縮型胃蛋白酶,混勻),37℃或室溫消化 3--30 分鐘(視標本新舊、厚薄自行調整)。用戶可以比較不同的消化時間,例如 5 分鐘,10 分鐘,20 分鐘,30 分鐘。以找到消化時間。原位雜交用 PBS 洗 3 次×5分鐘。蒸餾水洗 1 次。
5. 其余步驟和冰凍切片 6-11 步相同。
6. 結果觀察。
成立日期 | 2015-05-29 (10年) | 注冊資本 | 100萬元整 |
員工人數(shù) | 50-100人 | 年營業(yè)額 | ¥ 100萬以內 |
主營行業(yè) | 中間體,化學試劑,醫(yī)藥原料 | 經(jīng)營模式 | 工廠 |
產(chǎn)品名稱 | 價格 | 公司名稱 | 報價日期 | |
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¥790 |
VIP5年
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上海澤葉生物科技有限公司
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2024-11-12 | |
詢價 |
VIP3年
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上海嘉定區(qū)澄瀏公路52號
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2024-11-12 | |
¥2500 |
VIP1年
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上海晶風生物科技有限公司
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2024-11-12 | |
詢價 |
VIP5年
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上海賓穗生物科技有限公司
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2024-11-12 |