超級雜交液（Oligo探針雜交用）

產(chǎn)品及特點核酸雜交一般是指用一種標(biāo)記的核酸探針與印跡膜上的核酸進行雜交，由 此檢測印跡膜上是否存在與探針同源的核酸分子（靶分子）。核酸雜交是分子 生物學(xué)的基本技術(shù)之一，應(yīng)用非常廣泛。本產(chǎn)品為即用型 Oligo 探針專用核 酸雜交液，它具有下列特點：

1. 既可以用于 DNA Oligo 探針，也可以用于 RNA Oligo 探針。

2. 即開即用，使用方便。
規(guī)格及成分 成分 編號 10 mL 包裝 
本產(chǎn)品 LM130904 10 mL
使用手冊 1 份

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 印跡膜、Oligo 探針、6×SSC、2×SSC、0.1×SSC 

使用方法1. 對 Oligo 探針的雜交，Tm=GC 數(shù)量×4℃+AT 數(shù)量×2℃。

2. 對 Oligo 探針的雜交佳雜交溫度一般比 Tm 低 5℃。由于 Oligo 較 短，更容易受各種因素影響（如錯配率、修飾堿基比例等），所以佳溫 度需要適度摸索和優(yōu)化。

3. 確定洗膜溫度: Oligo 探針可以室溫洗膜。

4. 預(yù)雜交步驟

預(yù)雜交就是用不含 Oligo 探針的本產(chǎn)品跟印跡膜進行孵育，其目的是用 所含的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化 合物將印跡膜上會非特異地吸附 Oligo 探針分子的位點封閉，否則這些 位點會吸附 Oligo 探針，造成高背景。

1) 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中，使其充分濕潤。

2) 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中（塑料袋好預(yù)先封口，再剪掉一 角，留一個小口），按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 本產(chǎn)品的比例沿小口 加入本產(chǎn)品，然后用塑料封口機將口封牢。

3) 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在佳雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中， 保溫 1-2 小時，延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不 停的搖動狀態(tài)中，使本產(chǎn)品與印跡膜充分接觸。

5. 雜交步驟

1) 將 Oligo 探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中（先用剪刀剪一小口，加 入 Oligo 探針后用熱封機封口）。Oligo 探針的加入量視探針標(biāo)記效率而 定，一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷貝 基因，Oligo 探針的加入量應(yīng)加大，而對于檢測克隆的基因片段，則 Oligo 探針的量可減少。如果是放射性 Oligo 探針，應(yīng)將此塑料袋套在另一塑 料袋之中，以避免雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。

2) 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫，時間一般為 6-12 小時。

6. 洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中，一定不要使印跡膜干燥。 此步是將與印跡膜非特異結(jié)合的探針分子洗去而只留下特異結(jié)合的 Oligo 探針分子。由于非特異性雜交的雜交分子解鏈溫度較低，熱穩(wěn)定性 較差，在一定的溫度和較低的離子強度下，即可洗掉。

1) 雜交完畢，取出塑料袋，剪去一角，倒出所有的含 Oligo 探針的雜交液。 此含 Oligo 探針的雜交液可以多次使用再倒棄。

2) 剪開雜交袋，用鑷子取出印跡膜，浸沒于大量的 2×SSC（含 0.5 % SDS） 溶液中，室溫下振蕩漂洗 15 分鐘。

3) 重復(fù)上步操作一次。

4) 將印跡膜轉(zhuǎn)移至 0.1×SSC（含 0.1% SDS）溶液中，在計算好的洗膜 溫度下振蕩漂洗 30 分鐘至 1 小時。

5) 重復(fù)上步操作一次。

6) 將印跡膜轉(zhuǎn)移到濾紙上，吸去表面液體后印跡膜即可用于后續(xù)檢測。