超級雜交液（Oligo探針雜交用）

產(chǎn)品及特點核酸雜交一般是指用一種標記的核酸探針與印跡膜上的核酸進行雜交，由 此檢測印跡膜上是否存在與探針同源的核酸分子（靶分子）。核酸雜交是分子 生物學的基本技術(shù)之一，應(yīng)用非常廣泛。本產(chǎn)品為即用型 Oligo 探針專用核 酸雜交液，它具有下列特點：

1. 既可以用于 DNA Oligo 探針，也可以用于 RNA Oligo 探針。

2. 即開即用，使用方便。
規(guī)格及成分 成分 編號 10 mL 包裝 
本產(chǎn)品 LM130904 10 mL
使用手冊 1 份

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 印跡膜、Oligo 探針、6×SSC、2×SSC、0.1×SSC 

使用方法1. 對 Oligo 探針的雜交，Tm=GC 數(shù)量×4℃+AT 數(shù)量×2℃。

2. 對 Oligo 探針的雜交佳雜交溫度一般比 Tm 低 5℃。由于 Oligo 較 短，更容易受各種因素影響（如錯配率、修飾堿基比例等），所以佳溫 度需要適度摸索和優(yōu)化。

3. 確定洗膜溫度: Oligo 探針可以室溫洗膜。

4. 預雜交步驟

預雜交就是用不含 Oligo 探針的本產(chǎn)品跟印跡膜進行孵育，其目的是用 所含的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化 合物將印跡膜上會非特異地吸附 Oligo 探針分子的位點封閉，否則這些 位點會吸附 Oligo 探針，造成高背景。

1) 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中，使其充分濕潤。

2) 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中（塑料袋好預先封口，再剪掉一 角，留一個小口），按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 本產(chǎn)品的比例沿小口 加入本產(chǎn)品，然后用塑料封口機將口封牢。

3) 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在佳雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中， 保溫 1-2 小時，延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不 停的搖動狀態(tài)中，使本產(chǎn)品與印跡膜充分接觸。

5. 雜交步驟

1) 將 Oligo 探針加入到完成了預雜交的雜交袋中（先用剪刀剪一小口，加 入 Oligo 探針后用熱封機封口）。Oligo 探針的加入量視探針標記效率而 定，一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷貝 基因，Oligo 探針的加入量應(yīng)加大，而對于檢測克隆的基因片段，則 Oligo 探針的量可減少。如果是放射性 Oligo 探針，應(yīng)將此塑料袋套在另一塑 料袋之中，以避免雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。

2) 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫，時間一般為 6-12 小時。

6. 洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中，一定不要使印跡膜干燥。 此步是將與印跡膜非特異結(jié)合的探針分子洗去而只留下特異結(jié)合的 Oligo 探針分子。由于非特異性雜交的雜交分子解鏈溫度較低，熱穩(wěn)定性 較差，在一定的溫度和較低的離子強度下，即可洗掉。

1) 雜交完畢，取出塑料袋，剪去一角，倒出所有的含 Oligo 探針的雜交液。 此含 Oligo 探針的雜交液可以多次使用再倒棄。

2) 剪開雜交袋，用鑷子取出印跡膜，浸沒于大量的 2×SSC（含 0.5 % SDS） 溶液中，室溫下振蕩漂洗 15 分鐘。

3) 重復上步操作一次。

4) 將印跡膜轉(zhuǎn)移至 0.1×SSC（含 0.1% SDS）溶液中，在計算好的洗膜 溫度下振蕩漂洗 30 分鐘至 1 小時。

5) 重復上步操作一次。

6) 將印跡膜轉(zhuǎn)移到濾紙上，吸去表面液體后印跡膜即可用于后續(xù)檢測。