名稱Easy-Lowry蛋白定量試劑盒 (Easy-Lowry Protein Assay Kit)
試劑盒組分
組分500T1000T保存
試劑(A): Folin-Ciocalteu Reagent5ml10mlRT 避光
試劑(B1): 改良Lowry Reagent | Lowry A100ml2×100mlRT
試劑(B2): 改良Lowry Reagent | Lowry B2ml4mlRT
試劑(B3): 改良Lowry Reagent | Lowry C2ml4mlRT
臨用前，按Lowry A:B:C=50:1:1比例配制改良Lowry Reagent，即配即用
試劑(C): 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)20mg20mgRT
試劑(D): 蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液1.5ml1.5mlRT
試劑(E): ddH2O5ml10mlRT
自備材料
1. 酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)
2. 96孔板或離心管
【注】有效期： 6 個(gè)月有效。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后應(yīng)-20℃凍存。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
目前世界上最常用的蛋白濃度檢測(cè)方法是：BCA蛋白定量試劑盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford蛋白定量試劑盒(Bradford Protein Assay Kit)。
Phygene 改良Lowry法蛋白定量試劑盒是利用蛋白中肽鍵與銅離子結(jié)合成四配位基銅離子復(fù)合物，后者與Folin試劑(福林酚)反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色比色物，用分光光度法(酶標(biāo)儀或分光光度計(jì))檢測(cè)750nm處吸光度，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，求得待測(cè)蛋白樣品的濃度，在1～1500μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
使用說明操作步驟(僅供參考)：
1、 取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)(20mg)中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)-20℃保存。
2、 取適量 20mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為 1500μg/ml 或所需濃度。如取 75μl 20mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入 925μl 稀釋液，充分混勻，即配制1500μg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)。特別提示：待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中。例如待測(cè)蛋白溶解于蔗糖中，亦取 20mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶解于蔗糖中。一般也可以用0.9%NaCl 或 PBS 作為溶解 BSA 稀釋液。稀釋后的 1500μg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)-20℃長(zhǎng)期保存。
3、 根據(jù)樣品數(shù)量，按Folin-Ciocalteu Reagent : ddH2O =1:1的比例配制Folin-Ciocalteu工作液，充分混勻。
4、 根據(jù)樣品數(shù)量，按試劑(B1):試劑(B2):試劑(B3)=50:1:1的比例配制改良Lowry Reagent工作液，充分混勻。 例如取 10ml Lowry A、 0.2ml Lowry B、 0.2ml Lowry C，配制成10.4ml 改良 Lowry Reagent 工作液。
5、 將1500μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)用稀釋待測(cè)樣品的溶液5倍梯度稀釋，濃度分別為300μg/ml、60μg/ml、12μg/ml、2.4μg/ml、0μg/ml，各取40μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔。
6、 加待測(cè)蛋白樣品或稀釋液(空白對(duì)照)到96孔板的樣品孔中，如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測(cè)蛋白樣本的溶液不同，應(yīng)在待測(cè)蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液；如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測(cè)蛋白樣本的溶液相同，無需在待測(cè)蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液。
7、 用多通道微量移液器快速將200μl 配置好的改良Lowry Reagent工作液加入至各孔， 立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動(dòng)輕輕混勻30s。室溫準(zhǔn)確孵育 10min。
8、 用多通道微量移液器快速將20μl新鮮配置的Folin-Ciocalteu工作液加至上述各孔中， 立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動(dòng)輕輕混勻30s。加蓋以防止液體揮發(fā)，室溫準(zhǔn)確孵育 30min。
9、 輕輕混勻96孔板，酶標(biāo)儀或微量滴定板讀數(shù)儀測(cè)定750nm處吸光度，也可用分光光 度計(jì)測(cè)定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積，檢測(cè)樣品數(shù)量亦相應(yīng)減少。對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得相應(yīng)待測(cè)樣品的蛋白濃度。同時(shí)建議所以樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品)采用三復(fù)孔，求平均值。
注意事項(xiàng)
1、 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)粉末溶解于蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液后，即獲得蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液，該原液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測(cè)，該蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液-20℃長(zhǎng)期保存。
2、 待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測(cè)蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確。
3、 如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積。
4、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： Lowry法蛋白濃度測(cè)定試劑盒
康迪斯化工（湖北）有限公司是一家立足于生命科學(xué)領(lǐng)域有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的高新技術(shù)企業(yè)，主要從事生物試劑的研發(fā)與生產(chǎn),并以持續(xù)探索和開發(fā)生命科學(xué)技術(shù)為動(dòng)力，致力于為科研工作者提供實(shí)用、高效的科研試劑，為生命科學(xué)的研究與發(fā)展提供有意義的幫助。