改良Lowry法蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品及特點Folin 酚試劑（磷鉬酸和磷鎢酸混合物）跟蛋白質(zhì)中含酚氨基酸（色氨酸和酪氨酸）發(fā)生顏色反應(yīng)，可用于測定蛋白質(zhì)濃度，但靈敏度較低。Lowry在此基礎(chǔ)上加入 Biuret（雙縮脲）反應(yīng)步驟，即先在堿性條件下使蛋白質(zhì)和Cu+形成復(fù)合物，再使其與 Folin 酚試劑發(fā)生顯色反應(yīng)，產(chǎn)物在 750nm 檢測。Lowry 法使不含酚的蛋白質(zhì)也能被檢測出來，靈敏度是單獨使用 Folin 酚的10 倍左右，是雙縮脲反應(yīng)的 200 倍，因此成為早期檢測蛋白濃度的主要方法。Lowry 檢測原理圖如下：傳統(tǒng) Lowry 法受到很多常用的試劑（如 DTT、糖、甘油、Triton 等）干擾，步驟繁瑣。本公司對 Lowry 法進行改良，具有下列特點:

1. 即開即用，不需要單獨購買每個成分再配制。

2. 能抵抗部分干擾物（如一定濃度 SDS 或其他去污劑）的干擾。

3. 檢測線性范圍廣，在 2-100 µg，檢測上限比經(jīng)典 Lowry 法高 30%-40%。
改良Lowry法蛋白定量試劑盒
規(guī)格及成分 成份 編號 1000 次包裝
溶液 A 成分一 101102A1 208 mL
溶液 A 成分二 101102A2 16 mL
溶液 A 成分三 101102A3 16 mL
溶液 B 101102B 80 mL
溶液 C 101102C 80 mL
福林酚 100939 10 mL（用 100 mL 棕色瓶）
BSA 標(biāo)準(zhǔn)品
（2 mg/mL in 水） 101102D 1 mL
使用手冊 1 份

改良Lowry法蛋白定量試劑盒運輸及保存 常溫運輸和保存（但 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品需要-20℃保存），有效期一年。

自備試劑 去離子水、蛋白樣品、樣品緩沖液

使用方法 一：準(zhǔn)備工作

1、 制備溶液 A：將 16 mL 溶液 A 成分二和 16 mL 溶液 A 成分三加入到裝液 A 成分一的塑料瓶中，混合均勻得到 240 mL 溶液 A。注意：溶液 A各成分分開提供更加穩(wěn)定。

2、 制備 Lowry 工作液：將溶液 A、溶液 B 和溶液 C 按 3：1：1 的體積比混合得到 Lowry 工作液。此工作液可以室溫放置 2-3 周，所以用多少配多少。如果發(fā)現(xiàn)溶液 B 或溶液 C 有沉淀，需 37℃溶解并搖勻后再使用。

3、 制備福林酚工作液：在裝有 10 mL 福林酚的棕色塑料瓶中加入 90 mL 去離子水，搖晃混勻待用。此工作液在避光條件下可以放置 6 個月。

二：試管法

4、 先用去離子水將 BSA 標(biāo)準(zhǔn)（2 mg/mL）稀釋到 50 ug/mL，然后在標(biāo)記的試管中加入下列成分（單位：uL）。注意：每個樣品做三個稀釋度，每個稀釋度設(shè)置三次重復(fù)，陰性對照和標(biāo)準(zhǔn)品也做三次重復(fù)。

標(biāo)準(zhǔn)品（每個做三次重復(fù)，此處只列出一個）

編號 BSA 標(biāo)準(zhǔn)

（50 ug/mL） 水 總體積

陰性對照 0 0 200

1 0 200 200

2 25 175 200

3 50 150 200

4 100 100 200

5 150 50 200

6 200 0 200

樣品（以 1 個樣品、3 個稀釋度為例，每個稀釋度三個重復(fù)，

此處只列出一個）

編號 樣品 總體積

1 200 （稀釋度 1） 200

陰性對照 1

200（用稀釋度 1 稀釋的溶解蛋

白樣品的緩沖液） 200

2 200 （稀釋度 2） 200

陰性對照 2

200（用稀釋度 2 稀釋的溶解蛋

白樣品的緩沖液） 200

3 200 （稀釋度 3） 200

陰性對照 3 200（用稀釋度 3 稀釋的溶解蛋

白樣品的緩沖液） 200

5、 每管中加入 200 uL Lowry 工作液，振蕩混勻后室溫反應(yīng) 10 分鐘。

6、 每管中加入 100 uL 福林酚工作液，振蕩混勻后室溫反應(yīng) 30 分鐘。

7、 用容量為 0.5 mL、光徑為 1 cm 的玻璃比色杯或聚苯乙烯比色杯測定 750nm 的光吸收。測定時，先空白（即陰性對照）后樣品，測定樣品和 BSA標(biāo)準(zhǔn)品時，先低濃度后高濃度。測定未知樣品前需要將杯子清洗干凈，必要時可以用甲醇清洗吸附到比色杯壁上的染料。

8、 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品三個重復(fù)的平均值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)未知樣品的光吸收從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得其對應(yīng)的濃度。

三：96 微孔板法

9、 同上，只是反應(yīng)用 96 微孔板設(shè)置，用酶標(biāo)測試儀 750 nm 測定光吸收。

四、樣品中干擾物質(zhì)的去除（本產(chǎn)品不含相關(guān)產(chǎn)品，如果樣品中有干擾 Lowry 法蛋白定量的物質(zhì)（見附表），可另購本公司的微量蛋白質(zhì)沉淀試劑盒（CAT#:81217-50）去除，也可以用自備試劑按下法去除：用水將樣品調(diào)到體積為 200 uL, 加入 20 uL 0.15%去氧膽酸鈉，混勻，室溫放置 10 分鐘。加入 20 uL 72%的 TCA，室溫放置 5 分鐘。3000 g 離心

15 分鐘，小心去除上清。用 200 ul 水溶解蛋白沉淀后以用于 Lowry 法測定。附：常見 Lowry 法蛋白定量干擾物（低于所列濃度不干擾，高于所列濃度則會干擾，需要按上法去除。不能含任何濃度的 DTE，DTT 和硫酸胺)。干擾物 濃度 干擾物 濃度

Acetone 10% 2-Mercaptoethanol 1 mM

Aprotinin 10 mg/mL NaCl 1 M

CHAPS 0.05% NaOH 100 mM

DMF 10% NaPi 100 mM

DMSO 10% NP40 0.02%

EDTA 1 mM PMSF 1 mM

EGTA 1 mM SDS 1%

Ethanol 10% Sodium Citrate 100 mM

Glucose 100 mM Sucrose 7%

Glycin 100 mM Tris 10 mM

HEPES 1 mM Trition X-100 0.03%

Imidazole 25 mM Tween 20 0.05%

Methanol 10% Urea 3M