??????Annexin V-PE細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(Annexin V-PE Apoptosis Detection Kit)是用藻紅蛋白(Phycoerythrin, 簡稱PE)標(biāo)記的重組人Annexin V來檢測細(xì)胞凋亡時(shí)出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷酯酰絲氨酸的一種細(xì)胞凋亡檢測試劑盒。可以使用流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。
??????本試劑盒檢測的是紅色熒光，因此在待檢測的細(xì)胞已經(jīng)表達(dá)GFP等綠色熒光蛋白的情況下，特別適合使用本試劑盒檢測細(xì)胞凋亡。PE可以被495nm、545或564nm的激發(fā)光所激發(fā)，發(fā)出峰值為575nm的熒光。(參考圖1)

圖1.Phycoerythrin的熒光光譜

??????Annexin是一類廣泛分布于真核細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷酯結(jié)合蛋白，參與細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。但僅Annexin?V被報(bào)道可以調(diào)控一些PKC的活性。
??????Annexin?V選擇性結(jié)合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱PS)。磷酯酰絲氨酸主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細(xì)胞都會把磷酯酰絲氨酸外翻到細(xì)胞表面，即細(xì)胞膜外側(cè)。磷酯酰絲氨酸暴露到細(xì)胞表面后會促進(jìn)凝血和炎癥反應(yīng)。而Annexin?V和外翻到細(xì)胞表面的磷酯酰絲氨酸結(jié)合后可以阻斷磷酯酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。對于壞死細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失，Annexin V-PE可以進(jìn)入到細(xì)胞漿內(nèi)，與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)紅色熒光。
??????用帶有紅色熒光的熒光探針PE標(biāo)記的Annexin?V，即Annexin?V-PE，就可以用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷酯酰絲氨酸的外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。
??????正常細(xì)胞不會被Annexin?V-PE所染色，凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞都會被Annexin?V-PE所染色。如果希望進(jìn)一步區(qū)分凋亡和壞死細(xì)胞，可以使用其它細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(如C1062 Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒)進(jìn)行檢測。使用本試劑盒檢測細(xì)胞凋亡的效果參考圖2。

圖2. Annexin V-PE的染色效果圖。圖中紅色熒光為Annexin V-PE染色陽性細(xì)胞，藍(lán)色熒光為Hoechst 33342標(biāo)記的所有細(xì)胞的細(xì)胞核。Vehicle組為陰性對照，Annexin V-PE染色非常弱，L-929細(xì)胞處于正常狀態(tài)；TSZ組為陽性對照，L-929細(xì)胞用TSZ處理4小時(shí)。TSZ為TNFα、SM-164和Z-VAD-FMK組成的細(xì)胞壞死誘導(dǎo)試劑(C1058)。本圖僅作參考，不同的樣品不同的檢測條件，實(shí)際獲得的結(jié)果可能有較明顯的差別。
??????本試劑盒小包裝C1065S可以檢測20個樣品，中包裝C1065M可以檢測50個樣品，大包裝C1065L可以檢測100個樣品。
包裝清單：

保存條件：
??????4℃保存，半年有效。-20℃保存，一年有效。AnnexinV-PE需避光保存。
注意事項(xiàng)：
??????盡管經(jīng)測試AnnexinV-PE反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
??????如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
??????染色后宜盡快檢測，時(shí)間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
??????如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-PE，最終導(dǎo)致染色失敗。
??????由于細(xì)胞樣品的差異、凋亡和壞死程度的差異，可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果優(yōu)化Annexin V-PE的使用量，進(jìn)行適當(dāng)增加或減少。
??????熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
??????需自備PBS。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。