??????Annexin V-PE細胞凋亡檢測試劑盒(Annexin V-PE Apoptosis Detection Kit)是用藻紅蛋白(Phycoerythrin, 簡稱PE)標記的重組人Annexin V來檢測細胞凋亡時出現(xiàn)在細胞膜表面的磷酯酰絲氨酸的一種細胞凋亡檢測試劑盒。可以使用流式細胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設備進行檢測。
??????本試劑盒檢測的是紅色熒光，因此在待檢測的細胞已經(jīng)表達GFP等綠色熒光蛋白的情況下，特別適合使用本試劑盒檢測細胞凋亡。PE可以被495nm、545或564nm的激發(fā)光所激發(fā)，發(fā)出峰值為575nm的熒光。(參考圖1)

圖1.Phycoerythrin的熒光光譜

??????Annexin是一類廣泛分布于真核細胞細胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷酯結合蛋白，參與細胞內(nèi)的信號轉導。但僅Annexin?V被報道可以調(diào)控一些PKC的活性。
??????Annexin?V選擇性結合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱PS)。磷酯酰絲氨酸主要分布在細胞膜內(nèi)側，即與細胞漿相鄰的一側。在細胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細胞都會把磷酯酰絲氨酸外翻到細胞表面，即細胞膜外側。磷酯酰絲氨酸暴露到細胞表面后會促進凝血和炎癥反應。而Annexin?V和外翻到細胞表面的磷酯酰絲氨酸結合后可以阻斷磷酯酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應活性。對于壞死細胞，由于細胞膜的完整性已經(jīng)喪失，Annexin V-PE可以進入到細胞漿內(nèi)，與位于細胞膜內(nèi)側的磷脂酰絲氨酸結合，從而也使壞死細胞呈現(xiàn)紅色熒光。
??????用帶有紅色熒光的熒光探針PE標記的Annexin?V，即Annexin?V-PE，就可以用流式細胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷酯酰絲氨酸的外翻這一細胞凋亡的重要特征。
??????正常細胞不會被Annexin?V-PE所染色，凋亡細胞和壞死細胞都會被Annexin?V-PE所染色。如果希望進一步區(qū)分凋亡和壞死細胞，可以使用其它細胞凋亡檢測試劑盒(如C1062 Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒)進行檢測。使用本試劑盒檢測細胞凋亡的效果參考圖2。

圖2. Annexin V-PE的染色效果圖。圖中紅色熒光為Annexin V-PE染色陽性細胞，藍色熒光為Hoechst 33342標記的所有細胞的細胞核。Vehicle組為陰性對照，Annexin V-PE染色非常弱，L-929細胞處于正常狀態(tài)；TSZ組為陽性對照，L-929細胞用TSZ處理4小時。TSZ為TNFα、SM-164和Z-VAD-FMK組成的細胞壞死誘導試劑(C1058)。本圖僅作參考，不同的樣品不同的檢測條件，實際獲得的結果可能有較明顯的差別。
??????本試劑盒小包裝C1065S可以檢測20個樣品，中包裝C1065M可以檢測50個樣品，大包裝C1065L可以檢測100個樣品。
包裝清單：

保存條件：
??????4℃保存，半年有效。-20℃保存，一年有效。AnnexinV-PE需避光保存。
注意事項：
??????盡管經(jīng)測試AnnexinV-PE反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
??????如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
??????染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
??????如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-PE，最終導致染色失敗。
??????由于細胞樣品的差異、凋亡和壞死程度的差異，可根據(jù)預實驗結果優(yōu)化Annexin V-PE的使用量，進行適當增加或減少。
??????熒光物質均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
??????需自備PBS。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。