產(chǎn)品規(guī)格 （CAT#: AC1003）
GV3101(pSoup-p19)： 100μl/支
pGs2（control vector，10ng/μl ) 10μl
保存條件(保質(zhì)期)： -80℃（12個(gè)月）
GV3101(pSoup-p19)感受態(tài)細(xì)胞基因型
C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline(pSoup-p19-tetR)
GV3101(pSoup-p19)感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品說明
p19蛋白來源于番茄叢矮病毒，可抑制宿主對(duì)外源基因的RNA沉默效應(yīng)，提高異源基因轉(zhuǎn)錄本的穩(wěn)定性，進(jìn)而促進(jìn)異源蛋白的表達(dá)，廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因植物及煙草葉片，擬南芥葉片，番茄葉片或原生質(zhì)體的瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)中。GV3101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽：gent，賦予GV3101菌株慶大霉素抗性；在GV3101菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒：pSoup-p19即為GV3101(pSoup-p19)菌株，可幫助pGreen，62SK，pGs2等質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制，同時(shí)賦予該菌株四環(huán)素（tet）抗性。適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作。本公司生產(chǎn)的GV3101(pSoup-p19)化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pGs2(卡那霉素抗性)質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>103 cfu/μg DNA。
GV3101(pSoup-p19)感受態(tài)細(xì)胞操作方法
1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。
2. 每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（轉(zhuǎn)化效率較高，次使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量），用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天（當(dāng)平板只含有50 μg/ml kan 時(shí)，28℃培養(yǎng)48 h即可；平板中同時(shí)加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 時(shí)，需28℃培養(yǎng)60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90 h）。
GV3101(pSoup-p19)感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)
1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量，本公司生產(chǎn)的GV3101(pSoup-p19)化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞具有四環(huán)素抗性，但在轉(zhuǎn)入目標(biāo)質(zhì)粒涂板篩選陽性克隆時(shí)，只需加入目標(biāo)質(zhì)粒抗性的抗生素，不加四環(huán)素。
3. 平板上陽性克隆密度過大時(shí)，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
4. 利福平濃度不應(yīng)高于25 μg/ml，過高的利福平濃度不利于農(nóng)桿菌生長，會(huì)降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。
5. 培養(yǎng)基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌；根據(jù)所用菌株抗性加入鏈霉素或慶大霉素可防止Ti質(zhì)粒丟失，但鏈霉素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作，培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮鏈霉素或慶大霉素，Ti質(zhì)粒丟失的概率極低 (可以忽略)。
關(guān)鍵字： GV3101_pSoup-p19_感受態(tài)細(xì)胞_
上海聯(lián)邁生物工程有限公司（LMAI Bio)是一家經(jīng)營生物、儀器、試劑、耗材等科研產(chǎn)品的高新技術(shù)生命科學(xué)公司，在廣大用戶的幫助和支持下，經(jīng)過不懈的努力， 已成為國內(nèi)生命科學(xué)領(lǐng)域產(chǎn)品的一家供應(yīng)商，代理許多國際先進(jìn)水平的高科技產(chǎn)品，包括分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、診 斷等多個(gè)研究及應(yīng)用領(lǐng)域。 公司的服務(wù)和業(yè)務(wù)網(wǎng)絡(luò)遍及全國，在同行獲得一致好評(píng)。 特別是生物試劑和細(xì)胞產(chǎn)品更是種類齊全、價(jià)格實(shí)惠，美國原裝進(jìn)口原代細(xì)胞，專業(yè)培養(yǎng)基，常用傳統(tǒng)培養(yǎng)基，細(xì)胞培養(yǎng)用的相關(guān)試劑，氨基酸，抗生素，維他命類產(chǎn)品品種齊全，試劑耗材種類繁多。 公司的規(guī)模和產(chǎn)品種類日益擴(kuò)大和更新，我們一直秉承著代理優(yōu)質(zhì)品牌的產(chǎn)品，服務(wù)好每一位顧客，將