農(nóng)桿菌GV3101化學感受態(tài)細胞

產(chǎn)品及特點本產(chǎn)品為 GV3101 農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞，其具有利福平和慶大霉素抗性， 適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作，經(jīng) pCAMBIA2301 質 粒檢測轉化效率高達 104cfu/μg。

基因型： C58 (rif R ) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR/strepR ) Nopaline
規(guī)格及成分 成分 編號 10 支包裝
GV3101 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞 LM140384 10×100 μL
使用手冊 1 份

運輸及保存 干冰運輸，-80℃保存，有效期一年。

自備試劑 質粒 DNA、液氮等

使用方法 轉化前準備

1. 冰水浴和 37℃水浴。

2. 液氮或干冰/乙醇混合物。

3. 將抗性平板在 28℃培養(yǎng)箱中平衡至少 15 分鐘。轉化方法

1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞于冰水浴中融化。

2. 無菌條件下，向剛剛融化的感受態(tài)細胞懸液中加入需要轉化的質粒，每 100μL 感受態(tài)細胞加 1ug 質粒 DNA，輕柔混勻。冰水浴中靜置 10 分鐘。

3. 將離心管置于液氮中速凍 5 分鐘（注：也可以用干冰和無水乙醇混合物替代液氮）。

4. 迅速將離心管置于 37℃水浴靜置中 5 分鐘，不要晃動水面。然后快速轉至冰水浴中靜置 5 分鐘。

5. 加入 800 μL 無抗生素的 2×YT 或 LB 液體培養(yǎng)基，28-30℃振蕩培養(yǎng) 2~3小時。使菌體復蘇，表達抗性。

6. 5000 rpm 離心 1 分鐘收菌，保留 100 μL 左右上清，輕輕吹打重懸菌體，均勻涂布到含有相應抗生素的 LB 固體培養(yǎng)基平板上，待平板中的液體完全吸收后，倒置平板，28-30℃培養(yǎng) 48-72 小時。

注：當平板只含有 50 ug/mL kan 時，28℃培養(yǎng) 48 小時即可；平板中同時加入 50 ug/mL kan，20 ug/mL rif 時，需 28℃培養(yǎng) 60h；如果使用的平板含有 50 ug/mL rif 則需要 28℃培養(yǎng) 72-90 小時。