酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn) 本酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑是一種通過化學(xué)處理，高效快速制備釀酒酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，用于長期凍存以備后續(xù)轉(zhuǎn)化的產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：
1. 一次制備，-80℃保存，多次使用，免去每次轉(zhuǎn)化都要制備釀酒酵母感受態(tài)細(xì)胞。
2. 操作簡單，單溶液制備，除酵母培養(yǎng)的時間外，整個操作只需要 30 分鐘
3. 主要用于釀酒酵母 S. cerevisiae，也適用于其他多種實驗用酵母菌株，包括S. pombe、C. albicans、Pichia pastoris 等。
4. 受體酵母可以不含質(zhì)粒，也可用于攜帶有選擇性質(zhì)粒的酵母（如雙雜交體系中的酵母）。
5. 對釀酒酵母，最高轉(zhuǎn)化效率可達(dá)到 0.2-1×105個轉(zhuǎn)化子/ug 質(zhì)粒 DNA。對其他酵母，效率稍低，范圍在 100-2000 個轉(zhuǎn)化子/ug 質(zhì)粒 DNA。
6. 得到的感受態(tài)細(xì)胞可以用各種線性或環(huán)狀酵母穿梭質(zhì)粒 DNA 進(jìn)行轉(zhuǎn)化，例如 YIp, YRp, YCp, YEp 和 YAC 等。
7. 可以用于酵母雙雜交、定點(diǎn)突變（Site－Directed Mutagenesis）、基因破壞（Gene Disruption）、等位突變基因修復(fù)（Mutant Allele Recovery）等實驗。
8. 本產(chǎn)品可以制備 20 只酵母感受態(tài)細(xì)胞（需要 200mL 酵母培養(yǎng)液），并還帶高效轉(zhuǎn)化液。
自備試劑 YPD 培養(yǎng)基
酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒
規(guī)格及成分 成 份 編 號 小紙盒包裝
酵母化學(xué)感受態(tài)制備液 A 81109a 120 mL
酵母化學(xué)感受態(tài)制備液 B 81109b 6 mL
酵母化學(xué)感受態(tài)制備液 C 81109c 10 mL
酵母化學(xué)感受態(tài)轉(zhuǎn)化液 A 81109a 30 mL
酵母化學(xué)感受態(tài)轉(zhuǎn)化液 B 81109b 30 mL
使用手冊 81109sc 1 份
酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。
使用方法
一：酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞的制備
說明：按本方法制備 1 管酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞就需要 OD600 達(dá)到 0.6-1.0 的新鮮酵母培養(yǎng)液 10 mL，用戶需根據(jù)所需酵母感受態(tài)細(xì)胞的數(shù)量決定培養(yǎng)細(xì)胞的體積。如果超過 10 mL，則制備液的使用量需要按比例增加。
1. 挑取酵母受體菌的新鮮的單菌落（4℃放置不超過 3 周的也可以），接種到裝在 50mL 離心管中的 10 mL 的自備的 YPD 培養(yǎng)基中。
2. 30℃搖晃培養(yǎng)，搖床速度 250 rpm/分鐘，直到 OD600 達(dá)到 0.6-1.0（相當(dāng)于 0.6-1×107細(xì)胞/mL）。
3. 室溫 3000rpm 離心 5 min，棄上清得酵母細(xì)胞沉淀。
4. 新鮮制備適量的酵母感受態(tài)制備工作液。對 10 mL 酵母需要 5.25 mL的工作液，其配制方法是：將 4.75 mL 酵母化學(xué)感受態(tài)制備液 A、0.25mL 酵母化學(xué)感受態(tài)制備液 B 和 0.25 mL 酵母化學(xué)感受態(tài)制備液 C 加入到一個無菌的離心管中后充分震蕩混勻即可。酵母感受態(tài)制備工作液
可放室溫待用。
5. 用 0.5 倍體積的新鮮配制的酵母感受態(tài)制備工作液洗滌酵母細(xì)胞沉淀一次（對 10 mL 酵母則需要 5 mL 酵母感受態(tài)制備工作液）。即混合后振蕩 1 分鐘，室溫 3000rpm 離心 3 分鐘，去上清得洗滌后的酵母細(xì)胞沉淀。
6. 再用 0.02 倍體積的酵母感受態(tài)制備工作液充分重懸菌體（對 10 mL酵母，則需要 0.2 mL 酵母感受態(tài)制備工作液）。
7. 按每管 0.2 mL 分裝到冷凍管中，放入保溫冰盒中冷卻半小時后再放入-80℃冰箱待用。0.2 mL 的感受態(tài)細(xì)胞足夠 1 次轉(zhuǎn)化使用。注意：放入保溫冰盒的目的是使溫度緩慢下降，急凍將使轉(zhuǎn)化效率降低，這點(diǎn)跟大腸桿菌感受態(tài)制備過程不同。
二：化學(xué)轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細(xì)胞
1. 將總體積不超過 20 uL 的 0.1-5 ug 質(zhì)粒 DNA 加到剛從-80℃冰箱取出的、還處于凝固狀態(tài)的 0.2 mL 酵母感受態(tài)細(xì)胞上。注意：同時做一個不加質(zhì)粒 DNA 的陰性對照組。
2. 室溫充分振蕩直到凝固的感受態(tài)細(xì)胞完全融化。注意：此步非常關(guān)鍵，如果能在恒溫振蕩器上 37℃振蕩 5 分鐘，則效果更好。
3. 加入 1.4mL 酵母化學(xué)感受態(tài)轉(zhuǎn)化液 A，輕柔顛倒混勻一分鐘。
4. 30℃培養(yǎng) 1 小時。
5. 室溫 3000g 離心 5 分鐘，棄上清。
6. 在酵母細(xì)胞沉淀中加 1.0 mL 酵母化學(xué)感受態(tài)轉(zhuǎn)化液 B，振蕩一分鐘。
7. 室溫 3000g 離心 5 分鐘，棄上清。
8. 在酵母沉淀細(xì)胞中加入適量（如 100 uL）的酵母化學(xué)感受態(tài)轉(zhuǎn)化液 B，混勻后在在選擇培養(yǎng)基上全部涂盤。
9. 30℃培養(yǎng) 3-5 天后即得酵母轉(zhuǎn)化菌落。
關(guān)鍵字： 酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒廠家；酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒現(xiàn)貨
上?？道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專營生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品。總部位于上海，并在北京、廣東，江西，吉林等全國30多個省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學(xué)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)，華東師范大學(xué)，第二軍醫(yī)大學(xué)，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。