GV3101(pSoup-P19) Electroporation-Competent Cell 產(chǎn)品說明書
產(chǎn)品規(guī)格 (CAT#: LM1003)
GV3101(pSoup-P19) Elec: 50μl/支
pGs2(control vector,10ng/μl ) 10μl
保存條件(保質(zhì)期): -80℃(12個月)
GV3101(pSoup-P19) Electro感受態(tài)細(xì)胞基因型
C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline(pSoup-p19-tetR)
GV3101(pSoup-P19) Electro感受態(tài)細(xì)胞產(chǎn)品說明
P19蛋白來源于番茄叢矮病毒,可抑制宿主對外源基因的RNA沉默效應(yīng),提高異源基因轉(zhuǎn)錄本的穩(wěn)定性,進(jìn)而促進(jìn)異源蛋白的表達(dá),廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因植物及煙草葉片,擬南芥葉片,番茄葉片或原生質(zhì)體的瞬時表達(dá)系統(tǒng)中。GV3101菌株為C58型背景,核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽:gent,賦予GV3101菌株慶大霉素抗性;在GV3101菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒:pSoup-p19即為GV3101(pSoup-p19)菌株,可幫助pGreen,62SK,pGs2等質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制,同時賦予該菌株四環(huán)素(tet)抗性。適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作。唯地生物開發(fā)的GV3101 (pSoup-p19)電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化:經(jīng)pGs2(卡那霉素抗性)質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/ μg DNA;經(jīng)pGs2-ZH(卡那霉素抗性)質(zhì)粒(size:40 kd)檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×103 cfu/μg DNA。
GV3101(pSoup-P19) Electro感受態(tài)細(xì)胞操作方法
1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發(fā),待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘,待其融化,加入1-5 μg質(zhì)粒DNA(質(zhì)粒體積不大于6ul,用試劑盒抽提,雙蒸水溶解),用手撥打管底混勻,立即插入冰中,用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?;旌衔锟焖僖频诫姄舯校w上杯蓋,空管保留待用。
3. 啟動電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置參數(shù):C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此參數(shù)為Biorad 推薦,使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作),將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中,電擊完成快速插入冰中,加入700 μl無抗生素的LB并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中,28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
關(guān)鍵字: GV3101_pSoup_Electro感受態(tài)細(xì)胞_基因_
上海聯(lián)邁生物工程有限公司(LMAI Bio)是一家經(jīng)營生物、儀器、試劑、耗材等科研產(chǎn)品的高新技術(shù)生命科學(xué)公司,在廣大用戶的幫助和支持下,經(jīng)過不懈的努力, 已成為國內(nèi)生命科學(xué)領(lǐng)域產(chǎn)品的一家供應(yīng)商,代理許多國際先進(jìn)水平的高科技產(chǎn)品,包括分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、診 斷等多個研究及應(yīng)用領(lǐng)域。 公司的服務(wù)和業(yè)務(wù)網(wǎng)絡(luò)遍及全國,在同行獲得一致好評。 特別是生物試劑和細(xì)胞產(chǎn)品更是種類齊全、價格實惠,美國原裝進(jìn)口原代細(xì)胞,專業(yè)培養(yǎng)基,常用傳統(tǒng)培養(yǎng)基,細(xì)胞培養(yǎng)用的相關(guān)試劑,氨基酸,抗生素,維他命類產(chǎn)品品種齊全,試劑耗材種類繁多。 公司的規(guī)模和產(chǎn)品種類日益擴(kuò)大和更新,我們一直秉承著代理優(yōu)質(zhì)品牌的產(chǎn)品,服務(wù)好每一位顧客,將