乳酸含量(lactic acid,LA)試劑盒說(shuō)明書
微量法 100T/48S
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
乳酸是生物體代謝過(guò)程中重要的中間產(chǎn)物,與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細(xì)胞內(nèi)能量代謝密切 相關(guān),乳酸含量是評(píng)估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標(biāo)。
測(cè)定原理:
乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸,同時(shí)使 NAD+還原生成 NADH 和 H+,H+傳遞給 PMS 生成的 PMSH2還原 INT 生成紅色物質(zhì),在 530nm 處有特征吸收峰。
自備儀器和用品:
天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。
樣本處理:
1. 組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g,加入 1ml 提取液)加入 6 提取液,冰浴勻漿后于 4℃,12000g 離心 10min,取上清測(cè)定。
2. 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(10 4個(gè)):提取液體積(ml)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min);于 4℃,12000g 離心 10min,取上清測(cè)定。
3. 血清:直接測(cè)定。
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