纖維素（CLL）含量試劑盒說明書 

微量法 100 管/96 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義： 

纖維素是由葡萄糖組成的大分子多糖，通常與半纖維素、果膠和木質素結合在一起，是植物細胞壁的 主要結構成分。纖維素是一種重要的膳食纖維，是自然界中分布最廣、含量最多的一種多糖。

測定原理：

纖維素為β－葡萄糖殘基組成的多糖，在酸性條件下加熱能分解成β－葡萄糖。β－葡萄糖在強酸作用 下，可脫水生成β－糠醛類化合物。β－糠醛類化合物與蒽酮脫水縮合，生成糠醛衍生物。顏色的深淺可間 接定量測定纖維素含量。

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、80％乙醇、丙酮、濃硫 酸（不允許快遞）、研缽和蒸餾水。 

樣品的前處理：

1、細胞壁的提?。?/span>取約 0.3g 樣本，加入 1ml 80％乙醇，室溫快速勻漿，90℃水浴 20min（加熱過程中 EP 管可能爆開，建議用膠帶封口或使用防爆 EP 管），冷卻至室溫，6000g 25℃離心 10min，棄上清。沉 淀加入 1.5ml80％乙醇和丙酮各洗一遍（渦旋振蕩 2min 左右，6000g 25℃離心 10min，棄上清即可）， 沉淀即為粗細胞壁，加入 1ml 試劑一（去除淀粉）浸泡 15 小時，6000g 25℃離心 10min，棄上清，將 沉淀干燥，稱重得細胞壁物質（CWM）。

2、纖維素的提?。?/span>稱取烘干的 CWM 約 5mg，加入 0.5ml 蒸餾水充分勻漿(若烘干物質質地堅硬，可先研 碎后再加入 0.5ml 蒸餾水勻漿，或者用勻漿器勻漿)，勻漿液轉移至 EP 管中，用蒸餾水定容至 0.5ml， 置于冰水浴中，緩慢加入 0.75ml 濃硫酸，混勻，冰水浴中靜置 30min。8000g 4℃離心 10min，取上清 液，用蒸餾水稀釋 20 倍后待測。

測定步驟： 

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 620nm，蒸餾水調零。

2、調節(jié)水浴鍋至 95 度。

3、工作液的配制：在試劑二中加入 4ml 試劑三，充分溶解，如較難溶解，可加熱攪拌；用不完的試劑 4℃ 保存一周；