總膽固醇(total cholesterol,TC)含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
TC 包括游離膽固醇和膽固醇酯。TC 是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。
測(cè)定原理:
利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇(FC)和游離脂肪酸(FFA),從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為 FC; 進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化 FC 氧化,生成△4-膽甾烯酮和 H2O2;最后利用過(guò)氧化物酶催化 H2O2 氧化 4-氨基安替比林和酚,生成紅色醌類化合物;在 500nm 有特征吸收峰,其顏色深淺與 TC 含量成正比。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1ml 玻璃比色皿、異丙醇和蒸餾水。
TC 的提取:
1、組織中 TC 的提取:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織, 加入 1ml 試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿,8000xg 4℃離心 10min,取上清,即 TC 待測(cè)液。
2、細(xì)胞、細(xì)菌中 TC 的提?。合仁占?400-500 萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,加 1ml 試劑一,超聲波 破碎 1min(強(qiáng)度 20%,超聲 2s,停 1s),即 TC 待測(cè)液。
3、血清(漿)等樣品:直接測(cè)定。
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