蕓香堿抑制血管緊張素 II 誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細胞增殖。

目的： 評價蕓香堿對血管緊張素 II （Ang II） 誘導(dǎo)的培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細胞 （VSMC） 增殖的影響和可能的機制。 方法： 為了檢查蕓香堿抗增殖作用所涉及的機制，測定了一氧化氮 （NO） 水平和 NO 合成酶 （NOS） 活性。實時逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng) （RT-PCR） 測定 VSMC 增殖相關(guān)基因的表達，包括內(nèi)皮一氧化氮合酶 （eNOS） 和 c-myc 高血壓相關(guān)基因-1 （HRG-1）。 結(jié)果： 蕓香堿 （0.3-3.0 μmol/L） 抑制 Ang II 誘導(dǎo)的 VSMC 增殖，在 3.0 μmol/L 時效果最好。Rutaecarpine 拮抗 Ang II 誘導(dǎo)的細胞 NO 含量和 NOS 活性降低 （P <0.05）。Ang II 給藥抑制 eNOS 和 HRG-1 的表達，同時增加 c-myc 的表達 （P <0.05）。3.0 μmol/L 蕓香堿減輕了所有這些影響 （P <0.05）。 結(jié)論： 蕓香堿對 Ang II 誘導(dǎo)的大鼠 VSMC 增殖有效，這種效果至少部分是由于 NO 的產(chǎn)生和 VMSC 增殖相關(guān)基因表達的調(diào)節(jié)。

生物堿蕓香堿是小鼠和人肝微粒體中細胞色素 P450 1A 的選擇性抑制劑。

蕓香堿、吳茱萸堿和脫氫吳菖蒲堿是從傳統(tǒng)中藥 Evodia rutaecarpa 中分離的喹唑啉啉生物堿。使用小鼠和人肝微粒體研究了這些生物堿對細胞色素 P450 （P450） 催化的氧化的體外影響。
方法和結(jié)果：
在這些生物堿中，蕓香平對 CYP1A 催化的 7-甲氧基試鹵靈 O-脫甲基化 （MROD） 和 7-乙氧基試鹵靈 O-脫乙基化 （EROD） 活性表現(xiàn)出最有效和選擇性的抑制作用。EROD 與 MROD 的 IC（50） 比率為 6。對于 MROD 活性，Rutaecarpine 是一種非競爭性抑制劑，K（i） 值為 39 +/- 2 nM。相比之下，蕓香堿對苯并[a]芘羥基化 （AHH） 、苯胺羥基化和硝苯地平氧化 （NFO） 活性沒有影響。在人肝微粒體中，1 μM 蕓香堿分別導(dǎo)致 EROD、MROD 和非那西丁 O-脫乙基化活性降低 98% 、 91% 和 77%。相比之下，在 1 μM 蕓香平存在下觀察到對 AHH、甲苯磺丁脲羥基化、氯唑沙宗羥化和 NFO 活性的抑制低于 15%。為了了解抑制 CYP1A1 和 CYP1A2 的選擇性，使用 3-甲基膽蒽 （3-MC） 處理的小鼠的肝臟微粒體和表達雙順反子人 CYP1A1 和 CYP1A2 的大腸桿菌膜研究了蕓香堿的抑制作用。與 CYP1A2 抑制劑呋喃堿類似，蕓香堿優(yōu)先抑制 MROD 而不是 EROD，并且對 3-MC 處理的小鼠肝微粒體中的 AHH 沒有影響。對于雙順反子人 P450，蘆蕓香堿對 CYP1A1 的 EROD 活性的 IC（50） 值比 CYP1A2 高 15 倍。
結(jié)論：
這些結(jié)果表明，Rutaecarpine 是小鼠和人肝微粒體中 CYP1A2 的有效抑制劑。

蕓香堿的血管舒張作用：對血管平滑肌和內(nèi)皮細胞細胞內(nèi)鈣濃度的直接矛盾影響。

我們已經(jīng)檢查了低血壓作用和細胞內(nèi) Ca++ 調(diào)節(jié)的機制，這是蕓香堿 （Rut） 誘導(dǎo)的血管舒張的基礎(chǔ)。靜脈注射 在麻醉的 Sprague-Dawley 大鼠中推注 Rut 產(chǎn)生了劑量依賴性降壓作用。
方法和結(jié)果：
在離體大鼠主動脈環(huán)中，Rut （0.1-3 μ M） 分別抑制去甲腎上腺素和葉腎上腺素誘導(dǎo)的收縮的階段和強直反應(yīng)，主要通過內(nèi)皮依賴性機制。然而，Rut （3 μM） 的血管舒張作用在裸露的主動脈中持續(xù)存在，盡管程度遠小于完整組織。通過呋喃-2/AM（1-[2-（5-羧基噁唑-2-基）-6-氨基苯并呋喃-5-氧]-2-（2'-氨基-5'-甲基苯氧基）-乙烷-N，N，N，N-四乙酸五乙酰氧基甲酯）方法測定，Rut （10 μM），在細胞外 Ca++存在下，抑制 KCI 誘導(dǎo)的培養(yǎng)血管平滑肌細胞 （VSMC） 細胞內(nèi) Ca++ 濃度 （[Ca++]i） 的增加。Rut （10 μM） 還減弱了去甲腎上腺素誘導(dǎo)的 VSMC 中 [Ca++]i 的峰值上升，置于無 Ca++ 的溶液中。另一方面，在細胞外 Ca++ 存在下，Rut （1 和 10 μM） 增加了培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞 （EC） 的 [Ca++]i 水平。
結(jié)論：
總之，Rut 直接作用于 VSMC 和 EC。在 VSMC 中，它通過抑制 Ca++ 內(nèi)流和 Ca++ 從細胞內(nèi)儲存中釋放來減少 [Ca++]i。在 EC 中，Rut 通過增加 Ca++ 內(nèi)流來增強 EC [Ca++]i，可能導(dǎo)致一氧化氮釋放。VSMC 和 EC 中 Ca++ 的反常調(diào)節(jié)同時起作用導(dǎo)致血管舒張，這可能至少部分解釋低血壓作用。這是本研究最重要和獨特的特點。

降鈣素基因相關(guān)肽介導(dǎo)的蘆香堿對自發(fā)性高血壓大鼠的降壓和抗血小板作用。

我們之前已經(jīng)報道過，中藥 Rutaecarpine （Rut） 在苯酚誘導(dǎo)的雙腎、單夾高血壓大鼠中產(chǎn)生了持續(xù)的降壓作用。本研究的目的是確定 Rut 是否可以對自發(fā)性高血壓大鼠 （SHR） 發(fā)揮抗高血壓和抗血小板作用及其潛在機制。
方法和結(jié)果：
在體內(nèi)，給予 SHR Rut，監(jiān)測血壓。采集血液用于測量降鈣素基因相關(guān)肽 （CGRP） 、組織因子 （TF） 濃度和活性以及血小板聚集，并保存背根神經(jīng)節(jié)用于檢測 CGRP 表達。在體外，測量了 Rut 和 CGRP 對血小板聚集的影響，并測定了 CGRP 對血小板衍生的 TF 釋放的影響。Rut 在 SHR 中發(fā)揮持續(xù)的降壓作用，同時增加 CGRP 的合成和釋放。Rut 處理還顯示出對血小板聚集的抑制作用，伴隨著血漿中 TF 活性和 TF 抗原水平的降低。體外研究表明，在胸主動脈存在下，Rut 對血小板聚集有抑制作用，其被辣椒西平或香草素受體或 CGRP 受體的拮抗劑 CGRP （8-37） 消除。外源性 CGRP 能夠抑制血小板聚集和血小板衍生的 TF 的釋放，這些被 CGRP 消除 （8-37）。
結(jié)論：
結(jié)果表明，Rut 通過刺激 SHR 中 CGRP 的合成和釋放同時發(fā)揮抗高血壓和抗血小板作用，CGRP 介導(dǎo)的抗血小板作用與抑制血小板衍生的 TF 的釋放有關(guān)。

蕓香堿對雌性 BALB/c 小鼠的免疫抑制作用。

蕓香堿是從 Evodia rutaecarpa 中分離的主要喹唑啉生物堿。據(jù)報道，它具有廣泛的藥理活性，例如血管舒張、抗血栓形成和抗炎。
方法和結(jié)果：
在本研究中，確定了 Rutaecarpine 對雌性 BALB/c 小鼠免疫功能的不利影響。通過轉(zhuǎn)氨酶的血清活性測量，蕓香堿對小鼠的肝毒性參數(shù)沒有影響。同時，當(dāng)小鼠靜脈注射 10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg 或 80 cmg/kg 時，蕓香堿顯著降低抗體形成細胞的數(shù)量，并以劑量依賴性方式導(dǎo)致脾臟重量減輕。此外，服用 Rutaecarpine 的小鼠表現(xiàn)出脾細胞數(shù)量減少，脾臟中總 T 細胞、CD4 （+） 細胞、CD8 （+） 細胞和 B 細胞數(shù)量減少。Rutaecarpine 處理顯著抑制了 IL-2 、 干擾素-γ 和 IL-10 mRNA 的表達。小鼠服用蕓香堿后 CD4 （+） IL-2 （+） 細胞的數(shù)量顯著減少。此外，Rutaecarpine 以劑量依賴性方式導(dǎo)致細胞周期停滯在 G（0）+G（1） 期。蕓香堿劑量依賴性地引起肝細胞色素 P450 （CYP） 1A、2B 和 2E1 活性的顯著誘導(dǎo)。在脾淋巴細胞增殖試驗中，蕓香堿通過離體 LPS 和 Con A 抑制增殖，而對體外增殖沒有影響。
結(jié)論：
這些結(jié)果表明，單次推注靜脈注射 20mg/kg 的蕓香堿可能引起免疫抑制作用，并且蕓香堿誘導(dǎo)的免疫抑制可能至少部分是通過抑制細胞因子產(chǎn)生和細胞周期停滯在 G（0）+G（1） 期介導(dǎo)的，并且可能是由與代謝激活相關(guān)的機制引起的。

一類新型 COX-2 抑制劑，來自 Evodia rutaecarpa 的蕓香堿。

我們研究了一類新型 COX-2 抑制劑蕓香堿對骨髓來源的肥大細胞 （BMMC） 中 PGD2 和 COX-2 轉(zhuǎn)染的 HEK293 細胞中 PGE2 產(chǎn)生的影響。在雄性 Splague-Dawley （SD） 大鼠中由 lambda-卡拉膠誘導(dǎo)炎癥。
方法和結(jié)果：
從蕓香蕓苓果實中分離出蕓香堿 （8,13-二氫吲哚[2'，3'：3,4]吡啶[2,1-b]喹唑啉-5（7H）-one）。BMMC 用 WEHI-3 條件培養(yǎng)基培養(yǎng)。c-Kit 配體和 IL-10 是通過它們在桿狀病毒中的表達獲得的。 PGD2 和 PGE2 的產(chǎn)生由他們的檢測試劑盒測定。在 KL 、 LPS 和 IL-10 存在下，通過 BMMC 測定 COX-1 和 COX-2 蛋白和 mRNA 表達。腹膜內(nèi)給予溶于 0.1% 羧甲基纖維素中的蕓香平和吲哚美辛，1 小時后，將 lambda-卡拉膠溶液注射到大鼠的右后爪。在 lambda-角叉菜膠注射后 5 小時使用體積描記器測量爪體積。蕓香堿以濃度依賴性方式抑制 BMMC 中 PGD2 生成的 COX-2 和 COX-1 依賴期，IC50 分別為 0.28 μM 和 8.7 μM。它以劑量依賴性方式抑制 COX-2 轉(zhuǎn)染的 HEK293 細胞以劑量依賴性方式抑制外源花生四烯酸向 PGE2 的轉(zhuǎn)化。然而，蕓香堿既不抑制 PLA2 和 COX-1 活性，也不抑制 COX-2 蛋白和 mRNA 的表達，在 BMMC 中濃度高達 30 μM，表明蕓香堿直接抑制了 COX-2 活性。此外，Rutaecarpine 通過腹膜內(nèi)給藥對大鼠 lambda-carragenan 誘導(dǎo)的爪水腫顯示出體內(nèi)抗炎活性。
結(jié)論：
Evodia rutaecarpa 的抗炎活性至少部分歸因于抑制 COS-2。

蕓香堿對胰島素抵抗原代骨骼肌細胞炎性細胞因子的影響。

現(xiàn)在已經(jīng)確定，炎癥在許多慢性代謝疾病的發(fā)展中起著重要作用，包括胰島素抵抗 （IR） 和 2 型糖尿病 （T2DM）。骨骼肌負責(zé)胰島素依賴性葡萄糖總攝取的 75%;因此，骨骼肌 IR 被認為是全身性 IR 發(fā)展的主要缺陷。 我們先前的研究表明，蕓香堿 （Rut） 有益于 T2DM 大鼠的血脂分析，減輕炎癥，并改善腎臟、肝臟、胰腺病理狀況。然而，尚未研究 Rut 對 IR 骨骼肌細胞發(fā)育中炎性細胞因子的影響。因此，我們的目的是研究 Rut 對胰島素抵抗原代骨骼肌細胞 （IR-PSMC） 中炎性細胞因子白細胞介體 （IL）-1 、 IL-6 和腫瘤壞死因子 （TNF）-α 的影響。
方法和結(jié)果：
從 5 例新生 SD 大鼠中制備骨骼肌細胞原代培養(yǎng)物，通過細胞形態(tài)鑒定原代大鼠骨骼肌細胞，通過 MTT 法鑒定茹鐵蕓香堿對細胞增殖的影響。棕櫚酸 （PA） 誘導(dǎo) IR-PSMC 細胞，葡萄糖氧化酶和過氧化物酶 （GOD-POD） 法測定葡萄糖濃度。采用酶聯(lián)免疫吸附測定 （ELISA） 試劑盒檢測 Rut 對 IR-PSMC 細胞炎性細胞因子 IL-1 、 IL-6 和 TNF-α 的影響。結(jié)果顯示，新生大鼠原代骨骼肌細胞培養(yǎng) 2-4 d，平行排列規(guī)律，培養(yǎng) 7 d，細胞融合并形成肌管。結(jié)果表明，濃度為 0-180 的 Rut。0 μmol x L（-1） 對培養(yǎng)的原代骨骼肌細胞沒有細胞毒性作用。然而，暴露于 0.6 mmol x L（-1） PA 24 小時后，原代骨骼肌細胞能夠誘導(dǎo)胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)。獲得的結(jié)果表明，與 Rut 孵育 24 小時時，培養(yǎng)的 IR-PSMC 細胞產(chǎn)生 IL-1 、 IL-6 和 TNF-α 顯著減少 （P < 0.05 至 P < 0.001） 從 20 至 180.0 μmol x L（-1）。與 IR-PSMC 對照組相比，Rut 處理組的 IL-1 、 IL-6 和 TNF-α 呈劑量依賴性降低。
結(jié)論：
我們的結(jié)果表明，Rut 可能通過抑制 IR-PSMC 細胞中的炎性細胞因子促進葡萄糖消耗和改善胰島素抵抗。

蕓香堿對大鼠胃粘膜損傷的保護作用。

先前的研究表明，降鈣素基因相關(guān)肽 （CGRP） 保護胃粘膜免受乙酰水楊酸 （ASA） 誘導(dǎo)的損傷，并且蕓香堿激活香草素受體以誘發(fā) CGRP 釋放。
方法和結(jié)果：
在本研究中，我們檢查了蕓香堿對胃粘膜損傷的保護作用，并探討了蕓香堿的保護作用是否與通過激活大鼠香草素受體刺激內(nèi)源性 CGRP 釋放有關(guān)。在 ASA 誘導(dǎo)的潰瘍模型中，測定胃粘膜潰瘍指數(shù)、胃液 pH 值和血漿 CGRP 濃度。ASA 顯著增加胃黏膜潰瘍指數(shù)和 H+ 通過黏膜的反向擴散。劑量為 100 或 300 μg/kg （iv） 和 300 或 600 μg/kg （胃內(nèi)，ig.） 的蕓香堿降低了潰瘍指數(shù)和 H+ 的反向擴散，這通過用辣椒素 （50 mg/kg， sc.） 或辣椒西平 （3 mg/kg， iv） 預(yù)處理而消除，一種競爭性香草素受體拮抗劑。Rutaecarpine 顯著增加了 CGRP 的血漿濃度，這也被辣椒西平消除了。在應(yīng)激誘導(dǎo)的潰瘍模型中，蕓香平減少了胃粘膜損傷，這被辣椒西平 （5 mg/kg， ip） 消除。
結(jié)論：
這些結(jié)果表明，蕓香堿保護胃粘膜免受 ASA 和應(yīng)激誘導(dǎo)的損傷，蕓香堿的胃保護作用與通過激活香草素受體刺激內(nèi)源性 CGRP 釋放有關(guān)。