方法和結果:Conchocarpus fontanesianus (A. St.-Hill.)Kallunki&Pirani,蕓香科,俗稱pitaguará,是巴西圣保羅州和里約熱內盧州的本土特有樹種。基于抗膽堿酯衍生物可以作為治療阿爾茨海默病的新原型的信息,這項工作描述了通過評估來自域塔內西婭的乙醇莖提取物的抗膽堿酯酶活性來指導的分餾。結論:該程序提供了生物堿 Dictamnine (1)、γ-fagarine (2)、skimianine (3) 和 2-phenyl-1-methyl-4-quinolone (4) 以及香豆素 marmesin (5)。
據報道,Dictamnine 是一種天然植物產品,對細菌和真菌具有抗菌活性;然而,人們對微生物的Dictamnine反應機制仍然知之甚少。方法和結果:我們已經證明,Dictamnine對模式真菌釀酒酵母具有抗菌活性,最低抑制濃度(MIC)值為64 μg/ml。商業(yè)寡核苷酸微陣列用于確定由Dictamnine處理觸發(fā)的釀酒酵母的整體轉錄反應。我們使用分層聚類工具 T-profiler 來解釋我們的微陣列數據。Dictamnine誘導了幾個主要的轉錄反應。首先是誘導的環(huán)境脅迫響應,主要在Msn2p和Msn4p轉錄因子的控制下,以及含有PAC(RNA聚合酶A和C盒)和rRPE(核糖體RNA加工元件)基序的基因受到抑制的環(huán)境脅迫響應。第二個是涉及脂質生物合成的Upc2p介導的反應。第三個包括涉及多藥耐藥性 (MDR) 的 PDR3 和 RPN4 介導的反應。最后,用Dictamnine治療誘導TBP介導的反應。結論:TBP是指導基因轉錄的重要通用轉錄因子。對選定的基因進行定量實時RT-PCR,以驗證微陣列結果。此外,使用共聚焦激光顯微鏡檢查了 Dictamnine 暴露于釀酒酵母 L1190 (MATa/alpha) 期間的形態(tài)轉變。
白色念珠菌(C. albicans)和其他真菌是重要的人類和獸醫(yī)病原體。方法和結果:檢測Dictamnine單獨使用和聯(lián)合氟康唑(FLC)對臨床22種臨床白色念珠菌的最小抑制濃度(MIC),采用棋盤法分析Dictamnine和FLC聯(lián)合使用的作用抑制濃度指數(FICI)。結論:結果表明,Dictamnine單獨使用和與FLC聯(lián)合使用對白色念珠菌均具有良好的抗真菌活性。
檢測從 Dictamni Cortex 中提取和分離的乙醇提取物和 Dictamnine 的抗炎作用。方法和結果:采用高效離心分配色譜法分離必需的 Dictamnine,通過二甲苯誘導的小鼠 aruical 腫脹和小鼠腹部毛細血管通透性,研究乙醇提取物和 Dictamnine 的抗炎作用。采用己烷乙酸乙酯-乙醇-水(1∶1∶1∶1)組成的兩相溶劑體系進行分離。用高效液相色譜儀測定得到的Dictamnine的純度為98%。結果表明,與對照組相比,各添加量乙醇提取物均能顯著抑制二甲苯腫脹引起的小鼠耳廓(P0.05),分別為44.26%、52.46%、44.26%。中等劑量組Dictamnine能明顯抑制小鼠耳廓(P0.01),但與對照組相比,劑量在小鼠腹部毛細血管通透性上未顯著增加。結論:HPCPC是一種推薦的制備和純化方法,具有良好的分離效果,方法簡單、準確且易于操作。結果表明,乙醇提取物和Dictamnine在多種動物模型的抗炎效果中均表現出不同的抗炎作用。
研究Dictamnine在體外誘導的肝毒性,并探討其機制。方法與結果:HepG2細胞暴露于Dictamnine 2.5-800 μmol·L-1 24 h,MTT法檢測細胞活力。通過檢測乳酸脫氫酶(LDH)的釋放率檢測細胞膜損傷,并在造影顯微鏡下觀察細胞膜損傷的形態(tài)變化。采用酶標記儀分別測定HepG2細胞培養(yǎng)物中丙氨酸轉氨酶(ALT)、天冬氨酸轉氨酶(AST)、谷胱甘肽S-轉移酶(GST)和谷氨酰轉肽酶(GGT)活性。通過激光掃描共聚焦熒光顯微鏡測量線粒體膜電位。結果 25-800 μmol· Dictamnine暴露后HepG2細胞活力顯著降低L-1為24 h,呈濃度依賴性(r=0.965,P0.05),IC50值為(283±27)μmol·L-1.12.5-50 μmol· 暴露于Dictamnine后,HepG2細胞的LDH釋放速率顯著增加。L-1為24 h(P0.01)。HepG2細胞暴露于Dictamnine 100和200 μmol·L-1發(fā)生了很大的變化。細胞起皺又掉落。與對照組相比,Dictamnine 100和200 μmol后HepG2細胞培養(yǎng)物ALT和AST活性呈濃度依賴性顯著升高(P0.05)(r=0.995,P0.05和r=0.996,P0.05)L-1 24 h,線粒體膜電位明顯下降(r=0.978,P0.05)。暴露于Dictamnine 100和200 μmol·L-1 4 h,HepG2細胞培養(yǎng)物中GST活性顯著升高(P0.05);24 h時,Dictamnine中的GST活性為50,100和200 μmol·L-1組的升高也呈濃度依賴性(r=0.987,P0.05)。暴露于Dictamnine 200 μmol·L-1 48 h,HepG2細胞培養(yǎng)物中GGT活性升高(P0.05)。結論:較高濃度(≥100 μmol·L-1)具有潛在的肝毒性。細胞膜損傷和線粒體膜損傷可能與Dictamnine誘導的肝氧性機制有關。
Dictamni Radicis Cortex 的甲醇提取物對鼠傷寒沙門氏菌 TA100 和 TA98 具有致突變作用。方法和結果:采用 Sephadex LH 20 色譜柱和硅膠柱層析法,采用制備型 TLC 分離 Dictamni Radicis Cortex 中的兩種致突變化合物。這些通過UV、EI-Mass、1H-NMR鑒定為Dictamnine和γ-fagarine。Dictamnine 和 γ-fagarine 在菌株 TA100 和 TA98 中具有致突變性,其中 S9 混合物。劑量反應曲線在10-40μg范圍內呈線性。結論:Dictamnine和γ-fagarine在TA100菌株中具有約50-70個可逆轉菌落的特異性活性(His+/μg),而TA98菌株中約有30-50個可逆轉菌落。
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王玲