保存條件
2~8℃可保存1年。Annexin V-APC禁止冷凍保存。
實(shí)驗(yàn)原理
Annexin V-APC / PI熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒，可用于檢測(cè)懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的凋亡。
Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸 (PS) 有高度親和力。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸 (PS) 外翻到膜表面，而被熒光染料APC標(biāo)記的Annexin V結(jié)合，可通過流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)。
由于凋亡晚期或壞死細(xì)胞膜喪失完整性，而碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）可與雙鏈DNA特異性結(jié)合并產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光，與Annexin V搭配使用，可區(qū)分處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞。
本試劑盒檢測(cè)喜樹堿誘導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞凋亡效果如下圖所示：
試劑配制
1×Annexin V Binding Buffer：取1 mL Annexin V Binding Buffer (10×)加入9 mL去離子水中混勻。
實(shí)驗(yàn)操作
一步法
1． 細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)，300 ×g離心5 min，棄上清，收集細(xì)胞，PBS洗滌一次，輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。
2． 取1~5 × 105重懸的細(xì)胞，300 ×g離心5 min，棄上清。用PBS洗滌細(xì)胞一次，離心后棄上清，加入500 μL稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer重懸細(xì)胞。
3． 細(xì)胞懸液中加入5 μL的Annexin V-APC 染色液和5 μL的PI 染色液 (50μg/mL)。
4． 輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育15~20 min。
5． 立即上機(jī)檢測(cè)。如不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)于冰上避光靜置并于1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。
注：流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)Annexin V-APC可用APC通道，PI優(yōu)先選擇ECD通道，其次是PE通道；如果樣本有FITC通道的自發(fā)熒光，則選擇PerCP/Cy5.5通道。
兩步法
1． 細(xì)胞按照實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)，300 ×g離心5 min，棄上清，收集細(xì)胞，PBS洗滌一次，輕輕重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)。
2． 取1~5 × 105重懸的細(xì)胞，300 ×g離心5 min，棄上清。用PBS洗滌細(xì)胞一次，離心后棄上清，加入100 μL稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer重懸細(xì)胞。
3． 細(xì)胞懸液中加入2.5 μL的Annexin V-APC染色液和2.5 μL的PI 染色液 (50μg/mL)。（由于兩步法分辨率更高，染色液用量減半依然可得到媲美一步法的效果；用戶亦可根據(jù)自己的模型進(jìn)行滴定后加入適量的染色液，用更少的量獲得高質(zhì)量的結(jié)果。）
4． 輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育15~20 min。
5． 加入400 μL稀釋的1 × Annexin V Binding Buffer，混勻樣本。
6． 立即上機(jī)檢測(cè)。如不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)于冰上避光靜置并于1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。
注：流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)Annexin V-APC可用APC通道，PI優(yōu)先選擇ECD通道，其次是PE通道；如果樣本有FITC通道的自發(fā)熒光，則選擇PerCP/Cy5.5通道。
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。
2. 檢測(cè)貼壁細(xì)胞時(shí)，需收集誘導(dǎo)凋亡后產(chǎn)生的懸浮細(xì)胞，并與后續(xù)收集的貼壁細(xì)胞一起檢測(cè)。
3. 應(yīng)盡量避免消化貼壁細(xì)胞帶來的機(jī)械損傷。同時(shí)，胰酶的消化液中應(yīng)盡量不含EDTA，因?yàn)?/span>EDTA會(huì)影響Annexin V與磷脂酰絲氨酸的結(jié)合。
4. 如果使用含EDTA的胰酶，收集細(xì)胞后應(yīng)充分清洗，確保EDTA被去除干凈。
5. 染色后宜盡快檢測(cè)，時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
6. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
7. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
(本試劑產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療)
| 貨號(hào) | 名稱 | Storage | 規(guī)格1 | 規(guī)格2 | 規(guī)格3 | 規(guī)格4 |
| P-CA-101 | Annexin V-FITC | 2-8℃，12個(gè)月 | 50T | 100T | 200T | 500T |
| P-CA-103 | Annexin V-AF647 | 2-8℃，12個(gè)月 | 50T | 100T | 200T | 500T |
| P-CA-105 | Annexin V-PE | 2-8℃，12個(gè)月 | 50T | 100T | 200T | 500T |
| P-CA-107 | Annexin V-APC | 2-8℃，12個(gè)月 | 50T | 100T | 200T | 500T |
| P-CA-151 | Annexin V Binding Buffer (10×) | 2-8℃，12個(gè)月 | 10mL | 50mL |
|
|
| P-CA-161 | 碘化丙啶(PI)染色液 | 2-8℃，12個(gè)月 | 50T | 100T | 200T | 500T |
| P-CA-162 | 7-AAD染色液 | 2-8℃，12個(gè)月 | 50T | 100T | 200T | 500T |
| P-CA-201 | Annexin V-FITC/ PI熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 | 2-8℃，12個(gè)月 | 20T | 50T | 100T | 200T |
| P-CA-202 | Annexin V-FITC/ 7-AAD熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 | 2-8℃，12個(gè)月 | 20T | 50T | 100T | 200T |
| P-CA-203 | Annexin V-AF647/ PI熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 | 2-8℃，12個(gè)月 | 20T | 50T | 100T | 200T |
| P-CA-204 | Annexin V-AF647/ 7-AAD熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 | 2-8℃，12個(gè)月 | 20T | 50T | 100T | 200T |
| P-CA-206 | Annexin V-PE/ 7-AAD熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 | 2-8℃，12個(gè)月 | 20T | 50T | 100T | 200T |
| P-CA-207 | Annexin V-APC/ PI熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 | 2-8℃，12個(gè)月 | 20T | 50T | 100T | 200T |
| P-CA-208 | Annexin V-APC/ 7-AAD熒光雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 | 2-8℃，12個(gè)月 | 20T | 50T | 100T | 200T |
關(guān)鍵字： 試劑盒;
上海語純生物科技有限公司依托是由具有資深生命科學(xué)、生物技術(shù)背景人員共同創(chuàng)辦的技術(shù)企業(yè)。
公司專業(yè)經(jīng)營生物科學(xué)領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)儀器、研究試劑和實(shí)驗(yàn)室耗材，致力于向國內(nèi)外生物科學(xué)研究人員提供一流的服務(wù)。
目前，公司推出的產(chǎn)品涵蓋了生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域，因優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定、性價(jià)比高等特點(diǎn)在廣大科研機(jī)構(gòu)、研究院校及相關(guān)企業(yè)中贏得了良好的聲譽(yù)，從而建立了立體的營銷網(wǎng)絡(luò)和擁有廣泛的客戶資源。
公司向廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品的同時(shí)，始終將客戶服務(wù)和技術(shù)支持放在比產(chǎn)品銷售更重要的位置上，公司聘請(qǐng)了專職、技術(shù)支持人員，為客戶提供專業(yè)性、個(gè)性化的技術(shù)服務(wù)。