雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒 

一、產(chǎn)品簡介。

本產(chǎn)品由螢火蟲螢光素酶檢測試劑和海腎螢光素酶檢測試劑組成，在同一體系中依次測定兩種螢光素酶的活性，從而實現(xiàn)雙螢光素酶報告基因的檢測。檢測目的基因轉(zhuǎn)錄水平變化時可以將目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或 5’端的啟動子區(qū)域的 DNA 序列克隆到螢火蟲螢光素酶基因的上游（5’端），也可以把目的基因的 3’-UTR 區(qū)域的 DNA 序列添加

到螢火蟲螢光素酶基因的下游，構(gòu)建報告基因質(zhì)粒，與表達海腎螢光素酶的質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染細胞，表達螢火蟲螢光素酶和海腎螢光素酶。螢火蟲螢光素酶的表達水平通常反應(yīng)目的基因在特定條件下的轉(zhuǎn)錄調(diào)控變化，而海腎螢光素酶的表達水平一般用作體系內(nèi)參，來消除細胞轉(zhuǎn)染效率和細胞數(shù)量等因素的影響。

二、運輸與存儲條件。

本產(chǎn)品低溫運輸，依據(jù)各組份保存條件分開保存，有效期 12 月。

三、特點與優(yōu)勢。

1. 本試劑靈敏度高于市售同類試劑，可以更有效的檢測報告基因轉(zhuǎn)錄水平變化。

2. 本試劑盒操作簡單，能夠快速完成雙螢光素酶報告基因檢測。

四、使用說明。

1. 以 6 孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)的貼壁細胞為處理對象，實驗步驟如下：

2. 細胞轉(zhuǎn)染。細胞轉(zhuǎn)染實驗請參考本公司轉(zhuǎn)染試劑（Omifection，Cat：Omc-01）說明書中的實驗步驟，將編碼螢火蟲螢光素酶基因的質(zhì)粒與編碼海腎螢光素酶基因的質(zhì)粒按照 10:1（或 5:1）的比例混合，轉(zhuǎn)入 6 孔板的細胞中，2 μg/孔。

3. 細胞裂解液配制。將 5×細胞裂解液與 ddH2O 按照 1:4 的比例混合，配制成 1×細胞裂解液?，F(xiàn)

用現(xiàn)配，剩余的細胞裂解液可在 4℃保存一周。

4. 細胞裂解。轉(zhuǎn)染 48 h，棄培養(yǎng)液，預(yù)冷的 PBS 洗滌細胞 1 次，加入 1 ml 細胞裂解液（1×），置于 4 ℃的搖床上，輕輕旋轉(zhuǎn) 15-30 min，裂解細胞。裂解液轉(zhuǎn)入 1.5 ml EP 管中，12,000×g，4 ℃離心 5 min，棄沉淀，上清轉(zhuǎn)移至新的 EP 管中，作為待測樣品。

5. 海腎螢光素酶檢測試劑配制。每個樣品需要 100 μl 海腎螢光素酶檢測試劑。根據(jù)樣品數(shù)量，按照海腎螢光素酶底物:SFAR 稀釋液=1:50 的比例配制海腎螢光素酶檢測試劑。

6. 活性測定。打開檢測儀器，設(shè)置測定參數(shù)，一般延遲時間（整合時間）為 2 sec，測定時間為 10-20 sec。吸取 100 μl 螢火蟲螢光素酶檢測試劑，加入 EP 管（或 96 孔板）中，再加入 5-20 μl 待測樣品（細胞裂解液），混勻，測定螢火蟲螢光素酶活性值。同一檢測體系中再加入 100μl 海腎螢光素酶檢測試劑，混勻，測定海腎螢光素酶活性值。

7. 整理并分析螢火蟲螢光素酶活性值與海腎螢光素酶活性值的比例，鑒定目的基因表達變化。

五、注意事項

1. 酶促反應(yīng)受溫度影響，待測樣品和試劑應(yīng)達到室溫后再進行檢測。

2. 螢火蟲螢光素酶檢測試劑不可反復(fù)凍融，可分裝成100 μl/管，置于-80℃長期保存。

3. 手動測定時，樣品加入底物時的間隔時間和混合次數(shù)盡量一致，減少操作誤差。

4. 海腎螢光素酶的底物腔腸素是乙醇溶液，易揮發(fā)。收到產(chǎn)品時若發(fā)現(xiàn)其體積小于0.2 ml，可自行添加適當(dāng)?shù)臒o水乙醇補齊體積為0.2 ml。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。