海腎螢光素酶報告基因檢測試劑盒

一、產(chǎn)品簡介。

海腎螢光素酶（Renilla Luciferase）是一種分子量為 36 kD 的蛋白，最初從腔腸動物海腎(Renilla Reniformis)中分離鑒定出來.，在氧氣存在的情況下可以將腔腸素（Coelenterazine）氧化成腔腸酰胺（Coelenteramide），并發(fā)出生物螢光。檢測螢光的強度，即可確定海腎螢光素酶的表達水平?？梢詫⒛康幕虻霓D(zhuǎn)錄調(diào)控元件或啟動子區(qū)域 DNA 序列克隆到海腎螢光素酶基因的上游，或?qū)⒛康幕虻?3’-UTR 區(qū)域 DNA 序列整合到海腎螢光素酶表達基因的下游，通過測定海腎螢光素酶活性的變化來鑒定目的基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達變化。此外，海腎螢光素酶通常與螢火蟲螢光素酶共同表達在一個細胞內(nèi)，充作螢火蟲螢光素酶活性檢測的內(nèi)參。

二、運輸與存儲條件。

本產(chǎn)品低溫運輸，各組份依據(jù)保存條件分開保存，有效期 12 個月。

三、特點與優(yōu)勢。

1. 本試劑靈敏度高于市售同類試劑，可以更有效的檢測海腎螢光素酶活性。

2. 本試劑盒操作簡單，能夠快速完成海腎螢光素酶活性檢測。

四、使用說明。

1. 以 6 孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)的貼壁細胞為處理對象，實驗步驟如下：

2. 細胞轉(zhuǎn)染。細胞轉(zhuǎn)染實驗請參考本公司轉(zhuǎn)染試劑（Omifection，Cat：Omc-01）說明書中的實

驗步驟，將編碼海腎螢光素酶基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入 6 孔板的細胞中，2 μg/孔。

3. 細胞裂解液配制。將 5×細胞裂解液與 ddH2O 按照 1:4 的比例混合，配制成 1×細胞裂解液。現(xiàn)用現(xiàn)配，剩余的細胞裂解液可在 4℃保存一周。

4. 細胞裂解。細胞轉(zhuǎn)染 48 h，棄培養(yǎng)液，預冷的 PBS 洗滌細胞 1 次，加入 1 ml 細胞裂解液（1×），置于 4 ℃冰箱中的搖床上，搖晃 15-30 min，裂解細胞。裂解液轉(zhuǎn)入 1.5 ml EP 管中，12,000×g，4 ℃離心 5 min，上清轉(zhuǎn)移至新的 EP 管中，作為待測樣品。

5. 海腎螢光素酶檢測試劑配制。每個樣品需要 100 μl 檢測試劑。根據(jù)樣品數(shù)量，計算所需海腎螢光素酶檢測試劑體積，按照底物：稀釋液=1:50 的比例稀釋底物，制備海腎螢光素酶檢測試劑。

6. 活性測定。打開檢測儀器，設置測定參數(shù)，一般延遲時間（整合時間）為 2 sec，測定時間為 10-20 sec。吸取 100 μl 海腎螢光素酶檢測試劑，加入 EP 管（或 96 孔板）中，再加入 5-20 μl 待測樣品（細胞裂解液），混勻，儀器檢測。

五、注意事項

1. 酶促反應受溫度影響，待測樣品和試劑應達到室溫后再進行檢測。

2. 海腎螢光素酶的底物腔腸素是乙醇溶液，易揮發(fā)。收到產(chǎn)品時若發(fā)現(xiàn)其體積小于0.2 ml，可自行添加適當?shù)臒o水乙醇補齊體積為0.2 ml。

3. 配制的海腎螢光素酶檢測試劑，若不立即使用，可置于-20 ℃保存1周， -80 ℃保存一個月。

4. 手動測定時，樣品加入底物時的間隔時間和混合次數(shù)盡量一致，減少操作誤差。

5. 若與螢火蟲螢光素酶配套形成雙螢光素酶檢測系統(tǒng)，請使用具有滅活螢火蟲螢光素酶活性的特定海腎螢光素酶底物稀釋液（雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒中提供，SFAR稀釋液）。