海腎螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒

一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介。

海腎螢光素酶（Renilla Luciferase）是一種分子量為 36 kD 的蛋白，最初從腔腸動(dòng)物海腎(Renilla Reniformis)中分離鑒定出來.，在氧氣存在的情況下可以將腔腸素（Coelenterazine）氧化成腔腸酰胺（Coelenteramide），并發(fā)出生物螢光。檢測(cè)螢光的強(qiáng)度，即可確定海腎螢光素酶的表達(dá)水平?？梢詫⒛康幕虻霓D(zhuǎn)錄調(diào)控元件或啟動(dòng)子區(qū)域 DNA 序列克隆到海腎螢光素酶基因的上游，或?qū)⒛康幕虻?3’-UTR 區(qū)域 DNA 序列整合到海腎螢光素酶表達(dá)基因的下游，通過測(cè)定海腎螢光素酶活性的變化來鑒定目的基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)變化。此外，海腎螢光素酶通常與螢火蟲螢光素酶共同表達(dá)在一個(gè)細(xì)胞內(nèi)，充作螢火蟲螢光素酶活性檢測(cè)的內(nèi)參。

二、運(yùn)輸與存儲(chǔ)條件。

本產(chǎn)品低溫運(yùn)輸，各組份依據(jù)保存條件分開保存，有效期 12 個(gè)月。

三、特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)。

1. 本試劑靈敏度高于市售同類試劑，可以更有效的檢測(cè)海腎螢光素酶活性。

2. 本試劑盒操作簡(jiǎn)單，能夠快速完成海腎螢光素酶活性檢測(cè)。

四、使用說明。

1. 以 6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞為處理對(duì)象，實(shí)驗(yàn)步驟如下：

2. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染。細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)請(qǐng)參考本公司轉(zhuǎn)染試劑（Omifection，Cat：Omc-01）說明書中的實(shí)

驗(yàn)步驟，將編碼海腎螢光素酶基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入 6 孔板的細(xì)胞中，2 μg/孔。

3. 細(xì)胞裂解液配制。將 5×細(xì)胞裂解液與 ddH2O 按照 1:4 的比例混合，配制成 1×細(xì)胞裂解液。現(xiàn)用現(xiàn)配，剩余的細(xì)胞裂解液可在 4℃保存一周。

4. 細(xì)胞裂解。細(xì)胞轉(zhuǎn)染 48 h，棄培養(yǎng)液，預(yù)冷的 PBS 洗滌細(xì)胞 1 次，加入 1 ml 細(xì)胞裂解液（1×），置于 4 ℃冰箱中的搖床上，搖晃 15-30 min，裂解細(xì)胞。裂解液轉(zhuǎn)入 1.5 ml EP 管中，12,000×g，4 ℃離心 5 min，上清轉(zhuǎn)移至新的 EP 管中，作為待測(cè)樣品。

5. 海腎螢光素酶檢測(cè)試劑配制。每個(gè)樣品需要 100 μl 檢測(cè)試劑。根據(jù)樣品數(shù)量，計(jì)算所需海腎螢光素酶檢測(cè)試劑體積，按照底物：稀釋液=1:50 的比例稀釋底物，制備海腎螢光素酶檢測(cè)試劑。

6. 活性測(cè)定。打開檢測(cè)儀器，設(shè)置測(cè)定參數(shù)，一般延遲時(shí)間（整合時(shí)間）為 2 sec，測(cè)定時(shí)間為 10-20 sec。吸取 100 μl 海腎螢光素酶檢測(cè)試劑，加入 EP 管（或 96 孔板）中，再加入 5-20 μl 待測(cè)樣品（細(xì)胞裂解液），混勻，儀器檢測(cè)。

五、注意事項(xiàng)

1. 酶促反應(yīng)受溫度影響，待測(cè)樣品和試劑應(yīng)達(dá)到室溫后再進(jìn)行檢測(cè)。

2. 海腎螢光素酶的底物腔腸素是乙醇溶液，易揮發(fā)。收到產(chǎn)品時(shí)若發(fā)現(xiàn)其體積小于0.2 ml，可自行添加適當(dāng)?shù)臒o水乙醇補(bǔ)齊體積為0.2 ml。

3. 配制的海腎螢光素酶檢測(cè)試劑，若不立即使用，可置于-20 ℃保存1周， -80 ℃保存一個(gè)月。

4. 手動(dòng)測(cè)定時(shí)，樣品加入底物時(shí)的間隔時(shí)間和混合次數(shù)盡量一致，減少操作誤差。

5. 若與螢火蟲螢光素酶配套形成雙螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)，請(qǐng)使用具有滅活螢火蟲螢光素酶活性的特定海腎螢光素酶底物稀釋液（雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒中提供，SFAR稀釋液）。