??????碧云天生產(chǎn)的雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是先以螢光素(luciferin)為底物來(lái)檢測(cè)螢火蟲(chóng)螢光素酶(Firefly luciferase)，后以腸腔素(coelenterazine)為底物來(lái)檢測(cè)海腎螢光素酶(Renilla luciferase)，并且在后續(xù)加入海腎螢光素酶底物時(shí)，同時(shí)加入抑制螢火蟲(chóng)熒光素酶催化luciferin發(fā)光的物質(zhì)，使后續(xù)檢測(cè)僅僅檢測(cè)到海腎螢光素酶的活性，實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。
??????螢火蟲(chóng)螢光素酶是一種分子量約為61kD的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過(guò)程中，會(huì)發(fā)出生物螢光(bioluminescence)。海腎螢光素酶是一種分子量約為36kD的蛋白，在氧氣存在的條件下，可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide，在coelenterazine氧化的過(guò)程中也會(huì)發(fā)出生物螢光。生物螢光可以通過(guò)化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)或液閃測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定。本試劑盒的檢測(cè)原理參考圖1。

圖1. 雙螢光素酶的檢測(cè)原理圖。

??????通過(guò)螢光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、高效地檢測(cè)基因的表達(dá)。通常把感興趣基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或5’啟動(dòng)子區(qū)克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR區(qū)克隆在luciferase的下游等，構(gòu)建成報(bào)告基因(reporter gene)質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞，用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞，測(cè)定螢光素酶活性。通過(guò)螢光素酶活性的高低來(lái)判斷藥物處理等對(duì)目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。Renilla luciferase相對(duì)更多地被用作轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參，以消除細(xì)胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異。
??????螢火蟲(chóng)螢光素酶催化luciferin發(fā)光的最強(qiáng)發(fā)光波長(zhǎng)為560nm。海腎螢光素酶催化coelenterazine發(fā)光的最強(qiáng)發(fā)光波長(zhǎng)為465nm。
??????本試劑盒可以測(cè)定1000個(gè)樣品。
包裝清單：

保存條件：
??????報(bào)告基因細(xì)胞裂解液和海腎螢光素酶檢測(cè)緩沖液在4℃保存1個(gè)月有效，-20℃保存一年有效，-80℃可以長(zhǎng)期保存；螢光素酶檢測(cè)試劑和 海腎螢光素酶檢測(cè)底物(100×)在-20℃避光保存6個(gè)月有效，-80℃避光保存一年有效。
注意事項(xiàng)：
??????加入海腎螢光素酶檢測(cè)工作液后對(duì)于上一步驟中的螢火蟲(chóng)螢光素酶的抑制可以達(dá)到99%以上。但總會(huì)殘留微量活性，因此，宜在轉(zhuǎn)染時(shí)把海腎螢光素酶的表達(dá)量控制在其RLU讀數(shù)高于螢火蟲(chóng)螢光素酶RLU讀數(shù)的10%。海腎螢光素酶的讀數(shù)高于螢火蟲(chóng)螢光素酶的讀數(shù)是完全可以的，通常不會(huì)有明顯的負(fù)面影響。
??????為取得測(cè)定效果，在用單管的化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定時(shí)，樣品和測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)盡量控制在相同的時(shí)間內(nèi)，例如30秒內(nèi)；使用具有化學(xué)發(fā)光測(cè)定功能的多功能熒光酶標(biāo)儀時(shí)，宜先把樣品全部加好，然后統(tǒng)一加入螢火蟲(chóng)螢光素酶檢測(cè)試劑。
??????由于溫度對(duì)酶反應(yīng)有影響，所以測(cè)定時(shí)樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。
??????為保證螢光素酶檢測(cè)試劑的穩(wěn)定性，可以采取適當(dāng)分裝后避光保存的方法，以避免反復(fù)凍融和長(zhǎng)時(shí)
間暴露于室溫。經(jīng)測(cè)試，反復(fù)凍融三次，對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯影響。
??????樣品和測(cè)定試劑混合后，必須等待1-2秒，再進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定時(shí)間通常為10秒，根據(jù)情況也可以測(cè)定更長(zhǎng)或更短時(shí)間，但是同一批樣品宜使用相同的測(cè)定時(shí)間。
??????RG027-4 海腎螢光素酶檢測(cè)底物(100×)配制在無(wú)水乙醇中。由于無(wú)水乙醇容易揮發(fā)，有時(shí)會(huì)在初次使用時(shí)發(fā)現(xiàn)體積明顯小于100μl的情況，此時(shí)用無(wú)水乙醇把體積補(bǔ)足至100μl，并混勻后即可使用。
??????海腎螢光素酶檢測(cè)工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用，-20℃可以保存一周。隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)檢測(cè)效果會(huì)不斷下降，因此不可配制成工作液后長(zhǎng)期保存。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。