螢火蟲(chóng)螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒

一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介。

本產(chǎn)品的檢測(cè)試劑中含有 Luciferin，在螢火蟲(chóng)螢光素酶（Luciferase）的作用下被氧化成Oxyluciferin，并發(fā)出生物螢光。可以通過(guò)檢測(cè)生物螢光的強(qiáng)度，分析螢火蟲(chóng)螢光素酶的活性。為了檢測(cè)目的基因的轉(zhuǎn)錄水平變化，可以將目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或 5’端的啟動(dòng)子區(qū)域的 DNA 序列克隆到螢火蟲(chóng)螢光素酶基因的上游（5’端），也可以把目的基因的 3’-UTR 區(qū)域的 DNA 序列添加到螢光素酶基因的下游，構(gòu)建報(bào)告基因質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染細(xì)胞，檢測(cè)螢光素酶的活性，確定目的基因的表達(dá)變化，完成報(bào)告基因檢測(cè)分析。

二、運(yùn)輸與存儲(chǔ)條件。

本產(chǎn)品低溫運(yùn)輸，并依據(jù)各組份保存條件分開(kāi)保存，有效期 12 個(gè)月。

三、特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)。

1. 本產(chǎn)品靈敏度高于市售同類試劑，可以更有效的檢測(cè)基因轉(zhuǎn)錄水平變化。

2. 本試劑盒操作簡(jiǎn)單，能夠快速完成螢火蟲(chóng)螢光素酶活性檢測(cè)。

四、使用說(shuō)明。

1. 以 6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞為處理對(duì)象，實(shí)驗(yàn)步驟如下：

2. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染。細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)請(qǐng)參考本公司轉(zhuǎn)染試劑（Omifection，Cat：Omc-01）說(shuō)明書(shū)中的實(shí)驗(yàn)步驟，將編碼螢火蟲(chóng)螢光素酶基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入 6 孔板的細(xì)胞中，2 μg/孔。

3. 細(xì)胞裂解液配制。將 5×細(xì)胞裂解液與 ddH2O 按照 1:4 的比例混合，配制成 1×細(xì)胞裂解液?，F(xiàn)用現(xiàn)配，剩余的細(xì)胞裂解液可在 4℃保存一周。

4. 細(xì)胞裂解。轉(zhuǎn)染 48 h，棄培養(yǎng)液，預(yù)冷的 PBS 洗滌細(xì)胞 1 次，加入 1 ml 細(xì)胞裂解液（1×），置于 4 ℃冰箱中的搖床上，搖晃 15-30 min，裂解細(xì)胞。裂解液轉(zhuǎn)入 1.5 ml EP 管中，12,000×g，4 ℃離心 5 min，上清轉(zhuǎn)移至新的 EP 管中，作為待測(cè)樣品。加入細(xì)胞裂解液后也可直接用細(xì)胞刮刀刮下細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至 EP 管中，用移液器混勻，12,000×g，4 ℃離心 5 min，上清轉(zhuǎn)移至新的 EP管中，作為待測(cè)樣品。

5. 活性檢測(cè)。打開(kāi)檢測(cè)儀器，設(shè)置測(cè)定參數(shù)，一般延遲時(shí)間（整合時(shí)間）為 2 sec，測(cè)定時(shí)間為 10-20 sec。吸取 100 μl 螢火蟲(chóng)螢光素酶檢測(cè)試劑，加入 EP 管（或 96 孔板）中，再加入 5-20 μl 待測(cè)樣品（細(xì)胞裂解液），混勻，儀器檢測(cè)。

五、注意事項(xiàng)

1. 由于溫度對(duì)酶促反應(yīng)有影響，樣品和試劑應(yīng)達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定活性測(cè)定。

2. 檢測(cè)試劑不可反復(fù)凍融，可分裝成100 μl/管，置于-80 ℃長(zhǎng)期保存。

3. 手動(dòng)測(cè)定時(shí)，樣品加入底物時(shí)的間隔時(shí)間和混合次數(shù)盡量一致，減少操作誤差。