高純質(zhì)粒小提試劑盒
一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介。
本產(chǎn)品是一款從工程菌內(nèi)大量提取質(zhì)粒 DNA 的試劑盒，并能夠去除蛋白質(zhì)與 RNA，得到高純度的質(zhì)粒 DNA，用于轉(zhuǎn)染和酶切等生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
二、運(yùn)輸與存儲(chǔ)條件。
本試劑盒中的 RNase A 需低溫運(yùn)輸，-20 ℃保存，其它組份常溫運(yùn)輸與保存，有效期 12 個(gè)月。
三、特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)。
1. 有效去除蛋白質(zhì)與 RNA，得到高純度的質(zhì)粒 DNA。
2. DNA 純化柱可結(jié)合 20-30 μg 的質(zhì)粒 DNA。
四、使用說明
1. 試劑配制：
a) Buffer P1 (重懸液) 配制。將 RNase A 全部加入 Buffer P1 中，混勻，4 ℃保存。
b) Buffer W3（漂洗液）配制。溶液中加入 35 mL 無水乙醇，混勻，室溫保存。
2. 細(xì)菌收集。利用 15 mL 離心管收集 2-5 mL 菌液，12,000×g 離心 2 min，棄上清。將離心管倒立在紙巾上，吸盡殘余液體，以免影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)
3. 加入 250 μL Buffer P1（確定加入 RNase A），振蕩（vortex）至細(xì)菌完全重懸。（若細(xì)菌沉淀沒有完全重懸，會(huì)影響裂解效果，降低質(zhì)粒 DNA 提取量。）
4. 加入 250 μL Buffer P2（室溫較低時(shí)，Buffer P2 易沉淀，請(qǐng)?jiān)?37 ℃水浴鍋中加熱 10 min，待沉淀消失后再使用），輕柔地上下翻轉(zhuǎn) 20 次，液體變透明，保證細(xì)菌充分裂解。（不要?jiǎng)×艺鹗帲╲ortex），以免 DNA 斷裂。裂解時(shí)間不宜超過 5 min，以免質(zhì)粒 DNA 受到破壞。細(xì)菌充分裂解后液體變得清亮粘稠。如果仍然渾濁，則細(xì)菌過量，裂解不徹底，應(yīng)加大裂解液用量。）
5. 加入 350 μL Buffer P3，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 20 次，充分混勻，出現(xiàn)白色絮狀沉淀。（混勻要充分，以免出現(xiàn)局部沉淀，影響中和效果。）
6. 12,000×g 離心 10-20 分鐘，上清轉(zhuǎn)入 DNA 純化柱中，12,000×g 離心 30 sec，棄濾液。
7. 剩余的上清液加入相應(yīng)的 DNA 純化柱, 12,000×g 離心 30 sec，棄濾液。
8. 加入 500 μL Buffer W1（去蛋白液），12,000×g 離心 30 sec，棄濾液。
9. 加入 500 μL Buffer W3（漂洗液），12,000×g 離心 30 sec，棄濾液。
10. 空 DNA 純化柱，12,000×g 離心 2 min，去除 DNA 純化柱中殘余液體。
11. 將 DNA 純化柱轉(zhuǎn)移至新離心管中，在柱中央滴加 100 μL Elusion Buffer D（洗脫液）或 ddH2O，室溫靜置 2 min。
12. 12,000×g離心2 min，收集質(zhì)粒DNA溶液。
13. 測(cè)定濃度，或置于-20 ℃冰箱中保存。
五、注意事項(xiàng)
1. 質(zhì)粒提取量與細(xì)菌濃度及質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)。低拷貝質(zhì)?；虼笥?0 kb的大質(zhì)粒提取時(shí)應(yīng)加大細(xì)菌使用量。
2. 洗脫體積不應(yīng)小于30 μL，否則降低DNA產(chǎn)量。
3. 為了您的健康，實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，并佩戴手套與口罩。
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