高純質粒中提試劑盒
一、產品簡介。
本產品是一款從工程菌內大量提取質粒 DNA 的試劑盒，并能夠去除蛋白質與 RNA，得到高純度的質粒 DNA，用于轉染和酶切等生物學實驗。
二、運輸與存儲條件。
本試劑盒中的 RNase A 需低溫運輸，-20 ℃保存，其它組份常溫運輸與保存，有效期 12 個月。
三、特點與優(yōu)勢。
1. 有效去除蛋白質與 RNA，得到高純度的質粒 DNA。
2. DNA 純化柱可結合 2mg 質粒 DNA。
四、使用說明。
1. 試劑配制：
a) Buffer P1 (重懸液) 配制。將 RNase A 全部加入 Buffer P1 中，混勻，4 ℃保存。
b) Buffer W3（漂洗液）配制。溶液中加入 70 mL 無水乙醇，混勻。
2. 細菌收集。將菌液加入 50 mL 離心管，12,000×g 離心 2 min，棄上清。剩余菌液加入對應的離心管中，再次離心并棄上清，直至所有菌液收集完畢，將離心管倒立在紙巾上，吸盡殘余液體，以免影響后續(xù)實驗。
3. 加入 2.5 mL Buffer P1（確定加入 RNase A），振蕩（vortex）至細菌完全重懸。（若細菌沉淀沒有完全重懸，會影響裂解效果，降低質粒 DNA 提取量。）
4. 加入 2.5 mL Buffer P2（室溫較低時，Buffer P2 易沉淀，請在 37℃水浴鍋中加熱 10 min，待沉淀消失后再使用），輕柔地上下翻轉 20 次，液體變透明，保證細菌充分裂解。
（不要劇烈震蕩（vortex），以免 DNA 斷裂。裂解時間不宜超過 5 min，以免質粒 DNA 受到破壞。細菌充分裂解后液體變得清亮粘稠。如果仍然渾濁，則細菌過量，裂解不徹底，應加大裂解液用量。）
5. 加入 3.5 mL Buffer P3，立即溫和地上下翻轉 20 次，充分混勻，出現白色絮狀沉淀。（混勻要充分，以免出現局部沉淀，影響中和效果。）
6. 12,000×g 離心 10-20 分鐘，上清轉入 15 mL 離心管中。（盡量避免吸取白色沉淀）
7. 上清加入 DNA 純化柱，12,000×g 離心 1 min，棄濾液。剩余的上清液依次加入相應的 DNA 純化柱，12,000×g 離心 1 min，棄濾液，完成 DNA 吸附。
8. 加入 2 mL Buffer W1（去蛋白液），12,000×g 離心 1 min，棄濾液。
9. 加入 2 mL Buffer W3（漂洗液），12,000×g 離心 1 min，棄濾液。
10. 空的 DNA 純化柱，12,000×g 離心 2 min，盡量去除 DNA 純化柱中殘余液體。
11. 將 DNA 純化柱轉移至新的 15 mL 離心管中，在柱中央滴加 0.8-1 mL Elusion Buffer D 或 ddH2O，室溫靜置 5 min。
12. 12,000×g 離心 2 min，收集質粒 DNA 溶液。
13. 測定質粒 DNA 濃度，或置于-20 ℃冰箱中保存。
五、注意事項
1. 質粒提取量與細菌濃度及質?？截悢档纫蛩赜嘘P，低拷貝質?；虼笥?0 kb的大質粒提取時應加大細菌使用量。
2. 使用70 ℃預熱的Elution Buffer D或ddH2O洗脫質粒DNA，可以提高洗脫效率。
3. 新轉化的感受態(tài)細菌可以提高質粒DNA產量。
4. 洗脫體積不應小于0.5 mL，否則降低DNA洗脫效率。
5. 為了您的健康，實驗過程中請穿實驗服，并佩戴手套與口罩。
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