高純質(zhì)粒中提試劑盒

一、產(chǎn)品簡介。

本產(chǎn)品是一款從工程菌內(nèi)大量提取質(zhì)粒 DNA 的試劑盒，并能夠去除蛋白質(zhì)與 RNA，得到高純度的質(zhì)粒 DNA，用于轉(zhuǎn)染和酶切等生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

二、運(yùn)輸與存儲條件。

本試劑盒中的 RNase A 需低溫運(yùn)輸，-20 ℃保存，其它組份常溫運(yùn)輸與保存，有效期 12 個(gè)月。

三、特點(diǎn)與優(yōu)勢。

1. 有效去除蛋白質(zhì)與 RNA，得到高純度的質(zhì)粒 DNA。

2. DNA 純化柱可結(jié)合 2mg 質(zhì)粒 DNA。

四、使用說明。

1. 試劑配制：

a) Buffer P1 (重懸液) 配制。將 RNase A 全部加入 Buffer P1 中，混勻，4 ℃保存。

b) Buffer W3（漂洗液）配制。溶液中加入 70 mL 無水乙醇，混勻。

2. 細(xì)菌收集。將菌液加入 50 mL 離心管，12,000×g 離心 2 min，棄上清。剩余菌液加入對應(yīng)的離心管中，再次離心并棄上清，直至所有菌液收集完畢，將離心管倒立在紙巾上，吸盡殘余液體，以免影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

3. 加入 2.5 mL Buffer P1（確定加入 RNase A），振蕩（vortex）至細(xì)菌完全重懸。（若細(xì)菌沉淀沒有完全重懸，會(huì)影響裂解效果，降低質(zhì)粒 DNA 提取量。）

4. 加入 2.5 mL Buffer P2（室溫較低時(shí)，Buffer P2 易沉淀，請?jiān)?37℃水浴鍋中加熱 10 min，待沉淀消失后再使用），輕柔地上下翻轉(zhuǎn) 20 次，液體變透明，保證細(xì)菌充分裂解。

（不要?jiǎng)×艺鹗帲╲ortex），以免 DNA 斷裂。裂解時(shí)間不宜超過 5 min，以免質(zhì)粒 DNA 受到破壞。細(xì)菌充分裂解后液體變得清亮粘稠。如果仍然渾濁，則細(xì)菌過量，裂解不徹底，應(yīng)加大裂解液用量。）

5. 加入 3.5 mL Buffer P3，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 20 次，充分混勻，出現(xiàn)白色絮狀沉淀。（混勻要充分，以免出現(xiàn)局部沉淀，影響中和效果。）

6. 12,000×g 離心 10-20 分鐘，上清轉(zhuǎn)入 15 mL 離心管中。（盡量避免吸取白色沉淀）

7. 上清加入 DNA 純化柱，12,000×g 離心 1 min，棄濾液。剩余的上清液依次加入相應(yīng)的 DNA 純化柱，12,000×g 離心 1 min，棄濾液，完成 DNA 吸附。

8. 加入 2 mL Buffer W1（去蛋白液），12,000×g 離心 1 min，棄濾液。

9. 加入 2 mL Buffer W3（漂洗液），12,000×g 離心 1 min，棄濾液。

10. 空的 DNA 純化柱，12,000×g 離心 2 min，盡量去除 DNA 純化柱中殘余液體。

11. 將 DNA 純化柱轉(zhuǎn)移至新的 15 mL 離心管中，在柱中央滴加 0.8-1 mL Elusion Buffer D 或 ddH2O，室溫靜置 5 min。

12. 12,000×g 離心 2 min，收集質(zhì)粒 DNA 溶液。

13. 測定質(zhì)粒 DNA 濃度，或置于-20 ℃冰箱中保存。

五、注意事項(xiàng)

1. 質(zhì)粒提取量與細(xì)菌濃度及質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)，低拷貝質(zhì)粒或大于10 kb的大質(zhì)粒提取時(shí)應(yīng)加大細(xì)菌使用量。

2. 使用70 ℃預(yù)熱的Elution Buffer D或ddH2O洗脫質(zhì)粒DNA，可以提高洗脫效率。

3. 新轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)菌可以提高質(zhì)粒DNA產(chǎn)量。

4. 洗脫體積不應(yīng)小于0.5 mL，否則降低DNA洗脫效率。

5. 為了您的健康，實(shí)驗(yàn)過程中請穿實(shí)驗(yàn)服，并佩戴手套與口罩。