背景^[1][2]

磷脂類化合物是細(xì)胞膜的重要組成成分，具有重要地生理功能。高純的磷脂分級(jí)產(chǎn)品如卵磷脂和腦磷脂可廣泛用于營養(yǎng)，醫(yī)藥及化妝品行業(yè)。但由于目前的高純卵磷脂和腦磷脂多采用高效液相色譜(HPLC)淋洗模式制備，產(chǎn)品處理量小，溶劑消耗大，因而生產(chǎn)成本高，價(jià)格昂貴，從而限制了其應(yīng)用。為了降低成本，許多學(xué)者進(jìn)行了研究，如Kim等人嘗試著從簡(jiǎn)化流動(dòng)相這一角度出發(fā)，采用純甲醇為流動(dòng)相對(duì)蛋黃磷脂進(jìn)行了分離，取得了一定的效果，但無法從根本上解決淋洗色譜所固有的缺陷。

理化性質(zhì)^[1]

腦磷脂，又稱磷脂酰乙醇胺。在動(dòng)物體內(nèi)廣泛分布，尤富集于腦和脊髓，在大豆中含量較高，臨床上可用做止血藥和肝功能檢查的試劑。由甘油、脂肪酸、磷酸和乙醇胺組成的一種磷脂。新鮮制品是無色固體，空氣中易變?yōu)榧t棕色。有吸濕性。不溶于水和丙酮，微溶于乙醇，溶于氯仿和乙醚。可用作抗氧劑，也用于醫(yī)療上?？捎杉倚笸涝缀蟮男迈r腦或大豆榨油后的副產(chǎn)物中提取而得。

磷脂酰乙醇胺(Phosphatidyl Ethanolamine，簡(jiǎn)稱PE)和磷脂酰膽堿(Phosphatidyl Choline，簡(jiǎn)稱PC)是其中兩種重要的磷脂，俗稱腦磷脂和卵磷脂，被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化妝品等行業(yè)。高純度腦磷脂是良好的天然表面活性劑，具有獨(dú)特的生物活性和生理功能，無毒、無污染、無刺激，易生物降解而受到國內(nèi)外科技界和工業(yè)界的高度重視，其需求在逐年增加，但目前純度大于90％的腦磷脂產(chǎn)品我國尚依賴進(jìn)口，因此開發(fā)出適合我國國情的、低成本、高純度腦磷脂制備方法，具有重要的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)價(jià)值。

腦磷脂的精制方法主要有萃取法、柱層析法、沉淀法、膜分離法等。柱層析法由于具有操作簡(jiǎn)便、分離效果好、不需昂貴設(shè)備、處理量大等優(yōu)點(diǎn)，因而倍受關(guān)注。在柱層析法研究中，目前主要集中在價(jià)廉的硅膠和氧化鋁。

應(yīng)用^[3]

腦磷脂是良好的天然表面活性劑，具有獨(dú)特的生物活性和生理功能，無毒、無污染、無刺激，易生物降解而受到國內(nèi)外科技界和工業(yè)界的高度重視，同時(shí)腦磷脂作為一種新型的橡膠硫化促進(jìn)劑和/或防老劑。

制備^[2]

方法一：

新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中含PC75.0％(wt％)、PE16.0％(wt％)。取含水量為10％的硅膠用含甲醇10％的二氯甲烷混合溶劑濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用含甲醇10％的二氯甲烷混合溶劑沖洗50ml。進(jìn)60ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為含甲醇10％的二氯甲烷溶液)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并腦磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得腦磷脂0.55g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中腦磷脂的含量為91％。柱子用含氨2％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗150ml，再用含甲醇10％的二氯甲烷混合溶劑沖洗100ml后可重新進(jìn)樣，同樣沖洗流速控制在0.4ml/min。

大豆腦磷脂的生產(chǎn)方法：

1)乙醇提取，將粉末磷脂置于罐中，按1kg粉末磷脂需17L純度為96％的乙醇比例投入乙醇，攪拌回流提取50-70min，抽出提取液，提取三次，合并三次提取液；

2)冷藏，將上述提取液置于冷庫中，溫度為-5--7℃，冷藏不小于12h；三、濃縮，干燥，溫度80-90℃，真空度0.1-0.3MPa、時(shí)間1-3h，即得成品。

超臨界二氧化碳除脂生產(chǎn)水解腦蛋白粉和腦磷脂：

將新鮮或冷凍的動(dòng)物腦去除腦膜和血管，擠壓通過6目篩，平鋪于真空干燥箱烘盤上，在真空度為?0.08 Mpa、溫度 45℃,干燥至含水分3%以下，得干燥品，保存于?5℃?zhèn)溆?；將干燥的?dòng)物腦粉粒，分批裝入HA221?40?100型超臨界CO2萃取設(shè)備的萃取釜中，以萃取釜壓力32.5 Mpa，溫度41℃；分離釜Ⅰ壓力18 Mpa，溫度45℃；分離釜Ⅱ壓力6Mpa，溫度48℃；夾帶劑為95%乙醇，用量為腦干燥品的20 %；萃取時(shí)間2小時(shí)；二氧化碳流量60立升/公斤/小時(shí)；取出萃取釜中殘留物，用于酶解生產(chǎn)水解腦蛋白粉，取出萃取釜Ⅰ中膏狀物，用于提取腦磷脂。萃取釜Ⅱ中膏狀物可以去掉；

秤取萃取釜中殘留物100公斤，加純化水3倍，加入動(dòng)物蛋白水解專用酶，用量0.5 %，開動(dòng)攪拌機(jī)拌均勻，用20 %氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH為7.5，溫度 65℃±1℃，攪拌酶解3小時(shí)；加入風(fēng)味酶0.16%，在上述pH值和溫度條件下繼續(xù)水解3小時(shí)；升溫到90℃，滅酶20分鐘； 降溫到45℃，加活性炭4%，攪拌25分鐘，再靜置吸附30分鐘；板框壓濾除去固體雜質(zhì)，壓力0.12Mpa，反復(fù)循環(huán)直至濾液澄清，經(jīng)0.45µm微孔濾膜精濾，得精濾液；

按說明書預(yù)處理大孔樹脂HPD?200型，取經(jīng)處理的HPD?200型大孔樹脂70公斤裝入玻璃柱；取精濾液過柱，流速2BV/h，當(dāng)流出1BV時(shí)收集過柱液；加完精濾液后以4BV純化水洗脫精濾液，過柱液與洗脫液合并，經(jīng)預(yù)處理好的陰樹脂201×4FC，陽樹脂001×4脫鹽；收集脫鹽液，供濃縮、干燥；以含0.3 %的鹽酸純化水，洗滌大孔樹脂HPD?200,再用純化水洗至流出液的Ph值為5.0～6.5；接著以含0.4%的氫氧化鈉純化水洗滌大孔樹脂，再用純水洗直至Ph值為7.0～7.5；以1%硫酸銅在堿性條件下檢測(cè)不到雙縮脲反應(yīng)為止；所述的大孔樹脂可以再重復(fù)使用；陰樹脂201×4FC，陽樹脂001×4分別以2.1～5%的氫氧化鈉水溶液，3.0～4.5%的鹽酸再生；

真空薄膜濃縮脫鹽液，真空薄膜濃縮條件為：全程控制在65℃以下，真空度為?0.09Mpa；濃縮后溶液含固量22～25%；濃縮液噴霧干燥，噴霧干燥條件：噴嘴入口溫度170℃；出料口溫度50～70℃，得腦蛋白水解粉5公斤；取出分離釜Ⅰ中含腦磷脂類和膽固醇的膏狀物，在真空中干燥，真空度為?0.08 Mpa，溫度62℃，干燥4小時(shí)，得稠膏；

用4倍體積丙酮，分三次萃取稠膏中膽固醇和油脂類，萃取液與母液分別回收丙酮， 丟棄萃取液回收丙酮后得到的膽固醇和油脂類；在玻璃柱中裝入100份層析用硅膠；另取6份硅膠與回收丙酮后等量的母液混合，將混合物加于硅膠柱上部，接著用95%熱乙醇6倍, 溫度75℃，流速3份/分鐘，洗脫硅膠柱，收集腦磷脂乙醇液，真空回收乙醇，真空度為?0.06 Mpa，溫度60℃，直到餾出液沒有乙醇味為此；膏狀物為腦磷脂，含量≥90%，充氮?dú)饷芊獗４妗?/p>

主要參考資料

[1] 李衛(wèi), 邵友元, & 黃光斗. (2001). 柱層析法分離卵磷脂和腦磷脂. 湖北工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 16(2), 63-65.

[2] 張維農(nóng), 何海波, 馮鈺琦, & 達(dá)世祿. (2004). 柱色譜法制備高純大豆卵磷脂和腦磷脂研究. 中國油脂, 29(6), 54-58.

[3] 楊曉萍, 戴有盛, & 陳華. (1994). 魚油對(duì)小鼠腦磷脂中脂肪酸組成的影響. 營養(yǎng)學(xué)報(bào)(2), 164-168.