背景及概述[1][2]
粘蛋白是一類高度糖基化的蛋白，它由蛋白和寡糖鏈兩部分組成，且糖鏈 含量一般在50％～80％之間。該類粘蛋白寡糖鏈主要以O(shè)-連接的形式與蛋白骨架上的絲氨 酸(Ser)或蘇氨酸(Thr)結(jié)合，稱之為O-糖鏈。大量研究表明，正常動物小腸黏膜上皮細胞表面黏液層中含有大量粘蛋白，除了具有保護上皮細胞免受物理或化學(xué)損傷外，還參與預(yù)防多種疾病的發(fā)生和發(fā)展的功能，如預(yù)防囊腫纖維化癥(Cystic Fibrosis，CF)、粘液腺癌、炎癥性腸炎等。粘蛋白上的O-糖鏈結(jié)構(gòu)復(fù)雜，活性廣泛，在小腸細胞間相互作用、信號調(diào)控、分子運輸?shù)戎邪l(fā)揮重要的調(diào)控作用，直接影響生物體的生長發(fā)育與疾病的預(yù)防。
制備[1-2]
一、一種從豬小腸黏膜提取肝素后的廢棄物中提取粘蛋白的方法
(1)酶解：將豬小腸黏膜肝素加工廢棄物懸浮于Tris-HCl緩沖液中，升溫至37℃，加入胰蛋白酶，恒溫攪拌酶解，酶解結(jié)束后，煮沸，使酶失活；
(2)醇沉：將(1)中所得酶解液離心，上清液中加入乙醇進行沉淀，靜置12～24h，收集沉淀，上清液旋蒸濃縮，烘干，用作動物飼料；
(3)透析：將(2)中沉淀用蒸餾水復(fù)溶，轉(zhuǎn)入透析袋中，透析，去除小分子物質(zhì)，透析結(jié)束后，將透析內(nèi)液旋蒸濃縮，凍干，獲得粘蛋白粗提物；
(4)純化：將(3)所得粘蛋白粗提物用蒸餾水溶解，以蒸餾水和不同濃度的氯化鈉 水溶液為流動相，經(jīng)強陰離子交換樹脂分離純化，硫酸苯酚法檢測，合并收集含有粘蛋白的組分，蒸餾水透析，減壓濃縮，凍干，獲得高純度粘蛋白。
二、一種雞卵類粘蛋白(Hen-egg ovomucoid，縮寫為HOVM)的純化工藝，包括下述步驟：在pH值為2.5-3.5的雞卵類粘蛋白干粉粗品復(fù)溶所得水溶液或雞卵類粘蛋白粗提液中加入硫酸銨至硫酸銨終濃度為50-70％(w/v)，4-25℃下放置4h以上，使雜蛋白沉淀，雞卵類粘蛋 白溶解，之后，4℃下離心，棄沉淀取上清液；所得上清液中再加入硫酸銨至硫酸銨終濃度為80-100％(w/v)，4-25℃下放置4h以上，使雜蛋白溶解，雞卵類粘蛋白沉淀，之后，于4℃離心，棄上清液取沉淀，所得沉淀經(jīng)透析除鹽和冷凍干燥得到高純度的雞卵類粘蛋白。圖1所示為所得HOVM蛋白樣品在檢測波長為220nm下HPLC 法純度檢測色譜圖。
應(yīng)用[3]
CN201710897384.5一種基于貽貝粘蛋白的美白面膜，其特征在于，包括如下重量份的成分：0.5-2份 貽貝粘蛋白、0.5-2份聚乙烯醇、1.5-2份羧甲基纖維素鈉、0.2-0.8份維生素E、7-8份甘油和 80-120份去離子水。制備方法包括如下步驟：
(1)根據(jù)上述一種基于貽貝粘蛋白的美白面膜稱取各成分；
(2)將去離子水和聚乙烯醇加入到混合容器中，升溫攪拌至聚乙烯醇完全溶解，得 到聚乙烯醇溶液；
(3)將步驟(2)制備得到的聚乙烯醇溶液進行降溫處理，加入羧甲基纖維素鈉，攪 拌至混合均勻，得到羧甲基纖維素鈉和聚乙烯醇的混合溶液；
(4)將甘油加入到由步驟(3)制備得到的混合溶液中，攪拌至溶液混合均勻，得到 甘油混合溶液；
(5)將貽貝粘蛋白加入到步驟(4)制備得到的甘油混合溶液中，攪拌至溶液混合均勻，得到貽貝粘蛋白混合溶液；
(6)將維生素E加入到步驟(5)制備得到的貽貝粘蛋白混合溶液，攪拌，然后放入模具中，靜置處理，揭膜，即可得貽貝粘蛋白美白面膜。
本發(fā)明以貽貝粘蛋白、聚乙烯醇、羧甲基纖維素鈉、甘油、維生素E、去離 子水等為原料，制備得到一種基于貽貝粘蛋白的美白面膜。其無毒、無刺激、無副作用，被人體吸收快，美白效果好，并且使用后的面膜廢棄物可生物降解、無污染。其中使用的貽貝粘蛋白具有美白效果。黑色素一般在皮膚基底層的細胞中間合成，合成過程為：先由體內(nèi)酪氨酸和酪氨酸酶反應(yīng)形成多巴(DOPA)，再由多巴形成多巴醌，最后形成多巴色素，整個合成過程均為氧化反應(yīng)。而貽貝粘蛋白中含有的DOPA與色素形成過程中的DOPA一樣，也是酪氨酸在酪氨酸酶作用下反應(yīng)形成的。
由于氧化DOPA和未氧化 DOPA會相互交聯(lián)，形成高聚物，所以貽貝粘蛋白的DOPA可與黑色素形成過程中生成的DOPA 反應(yīng)，形成高聚物，從而中止黑色素的形成。同時貽貝粘蛋白還可以作為還原劑，抑制DOPA 的氧化反應(yīng)，進而抑制黑色素的生成。使用的維生素E為細胞膜上的重要組成成分，亦是細胞膜上的主要抗氧化劑，使用過程中同樣可以抑制DOPA的氧化反應(yīng)，進而抑制黑色素的生成，可以起到美白的作用。
主要參考資料
[1] CN201510167253.2 從豬小腸黏膜提取肝素后的廢棄物中提取粘蛋白的方法
[2] CN201410348559.3 雞卵類粘蛋白的純化工藝
[3] CN201710897384.5一種基于貽貝粘蛋白的美白面膜及其制備方法