背景^[1-6]

Pierce Silver Stain for Mass Spectrometry是目前來(lái)說(shuō)用于檢測(cè)和觀察蛋白最靈敏的顯色方法。這種技術(shù)利用銀離子能夠強(qiáng)烈的結(jié)合到某些蛋白功能集團(tuán)上，比如羧酸集團(tuán)(Asp和Glu),咪唑(His),硫氫基(Cys),以及氨基(Lys)。

在顯色溶液的幫助下，銀離子還原成銀金屬?gòu)亩霈F(xiàn)了可視化的條帶。既然這種技術(shù)提供最高的靈敏度(它可以用于檢測(cè)低于1ng的蛋白)同時(shí)對(duì)于涉及到微量蛋白的應(yīng)用來(lái)說(shuō)會(huì)非常有用,同時(shí)它在使用中也有很多缺點(diǎn)。

包括如下:

Pierce Silver Stain是時(shí)間和勞動(dòng)密集型的。染色過程涉及多個(gè)步驟和試劑，凝膠染色之后需要加入顯色劑。因?yàn)轱@色需要的時(shí)間在各個(gè)膠之間變動(dòng)很大，使用這個(gè)技術(shù)不能保證在定量分析中足夠的重復(fù)性。狹窄的線性動(dòng)力學(xué)范圍。這使得銀染不是非常適合進(jìn)行定量。不能染色所有的蛋白。銀染不好的地方在于不能對(duì)于常見翻譯后的蛋白修飾，比如糖蛋白和磷酸化蛋白進(jìn)行染色。對(duì)于下游的應(yīng)用提供有限的兼容性。傳統(tǒng)的銀染要求使用戊二醛或甲醛，這些化學(xué)物質(zhì)能夠?qū)е履z中蛋白的化學(xué)交聯(lián)。這限制了兼容方法的數(shù)量用于質(zhì)譜分析。最新的質(zhì)譜兼容銀染方法已經(jīng)有商用的產(chǎn)品能夠提供更大的兼容性，但是仍然和傳統(tǒng)的銀染方法一樣有相同的缺點(diǎn)。

Pierce Silver Stain用于SDS-PAGE、非變性PAGE或2D電泳膠上進(jìn)行蛋白銀染，經(jīng)過消除液處理后，去除附著蛋白質(zhì)和膠上的銀粒，再經(jīng)過原位酶解、脫鹽等蛋白質(zhì)質(zhì)譜樣品制備布置后就可以用于質(zhì)譜分析。本試劑盒具有低背景和檢測(cè)靈敏度高等特點(diǎn)，可在3小時(shí)內(nèi)完成銀染及染色后膠內(nèi)銀粒子的清除。用BSA蛋白檢測(cè)靈敏度可以達(dá)到0.5 ng。

應(yīng)用^[7][8]

用于肺癌早診蛋白質(zhì)譜的篩查鑒定及SWI/SNF染色質(zhì)重組復(fù)合物失調(diào)研究。

肺癌包括小細(xì)胞肺癌(SCLC)的和非小細(xì)胞肺癌,后者約占所有肺癌類型的80%。肺癌是全球癌癥相關(guān)死亡的首要病因,因?yàn)榇蠖鄶?shù)肺癌在診斷時(shí)已經(jīng)出現(xiàn)晚期轉(zhuǎn)移。最近的研究表明,肺癌患者的外周血中存在腫瘤相關(guān)的特異性抗原的自身抗體,可用來(lái)作為一種肺癌早期檢測(cè)的生物標(biāo)志物。材料與方法:我們用20例非小細(xì)胞肺癌組織標(biāo)本(Ⅰ至IV期)構(gòu)建了一個(gè)噬菌體展示文庫(kù)。然后用肺癌患者和正常健康對(duì)照血清對(duì)這個(gè)文庫(kù)進(jìn)行生物淘洗富集和血清免疫學(xué)分析。

噬菌體表達(dá)腫瘤相關(guān)蛋白的初步挑選是建立在患者與正常健康對(duì)照組患者的血清抗體的親和力差別的基礎(chǔ)上。噬菌體表達(dá)蛋白的基因序列確認(rèn)后,從非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株和組織標(biāo)本的基因芯片中可以查找那些讀碼框內(nèi)表達(dá)蛋白對(duì)應(yīng)的基因表達(dá)水平。表達(dá)上調(diào)的基因編碼的噬菌體表達(dá)蛋白被選定用于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)。我們進(jìn)一步用40例非小細(xì)胞肺癌患者和36例健康對(duì)照組血清來(lái)檢測(cè)這些腫瘤相關(guān)自身抗體的有效性。

邏輯回歸模型(Logistic regression models)和棄一交叉驗(yàn)證法(Leave-one-out cross validation)被用來(lái)評(píng)估單一和聯(lián)合標(biāo)志物預(yù)測(cè)肺癌能力,而后一種統(tǒng)計(jì)方法也用于分析這些標(biāo)志物與疾病分期的關(guān)系。

材料與方法:

(1)來(lái)自吸煙者與非吸煙者的101例肺癌細(xì)胞株和83例非小細(xì)胞肺癌及配對(duì)良性肺組織樣本用于此項(xiàng)研究。

(2)應(yīng)用NextGen測(cè)序和Sanger測(cè)序技術(shù)用于對(duì)肺癌細(xì)胞株DNA的SWI/SNF染色質(zhì)重組復(fù)合物基因進(jìn)行測(cè)序。

(3)應(yīng)用Western Blot技術(shù)檢測(cè)肺癌細(xì)胞株核蛋白提取物中部分SWI/SNF染色質(zhì)重組復(fù)合物的蛋白表達(dá)水平。

(4)應(yīng)用化學(xué)誘導(dǎo)甲基化用于檢測(cè)BRM蛋白缺失的細(xì)胞株。

(5)應(yīng)用基因芯片用于檢測(cè)肺癌細(xì)胞株和組織樣本中全基因組基因的表達(dá)水平。

(6)應(yīng)用單核苷酸多態(tài)性芯片分析用于檢測(cè)肺癌細(xì)胞株和組織樣本中全基因組基因的拷貝數(shù)變化。

(7)應(yīng)用免疫組化芯片染色用于對(duì)肺癌組織中BRG1和BAF250a的表達(dá)進(jìn)行分析。

參考文獻(xiàn)

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