背景[1-7]
Smarter DNA Clean Beads基于SPRI（Solid Phase Reverse Immobilization）原理制備，采用超順型磁珠，配合獨(dú)特的緩沖體系，提供了一種簡單、快速、高效的DNA回收方法。本產(chǎn)品可特異性吸附DNA，回收低至50 bp的DNA片段，并有效去除引物二聚體、dNTP、無機(jī)鹽及蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，得到高質(zhì)量的DNA回收產(chǎn)物。
磁珠經(jīng)過不同功能基團(tuán)的有效包被，可實(shí)現(xiàn)對(duì)核酸的高通量、自動(dòng)化提取，已廣泛應(yīng)用于基因測序、分子診斷等領(lǐng)域。根據(jù)目前市場磁珠需求，集中專業(yè)科研人員，致力于磁珠系列產(chǎn)品的創(chuàng)新開發(fā)，目前已經(jīng)擁有多款核酸磁珠類產(chǎn)品，可應(yīng)用于基因測序、PCR、克隆等多種實(shí)驗(yàn)。
·適用范圍廣：50 bp-20 kb DNA-片段；
·回收率高：高達(dá)85%以上；
·純化力好：DNA產(chǎn)物A260/280=1.8-2.0；
·操作簡便：30 min內(nèi)完成整個(gè)操作流程，無需反復(fù)離心；
·應(yīng)用多樣：PCR產(chǎn)物純化、酶切產(chǎn)物純化、cfDNA回收、NGS建庫產(chǎn)物回收；
·產(chǎn)物下游應(yīng)用：酶切、連接、克隆、NGS建庫等。
注意事項(xiàng)
1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2）磁珠使用前須在室溫平衡至少30 min。
3）80%乙醇需現(xiàn)用現(xiàn)配，否則將影響回收效率。
4）進(jìn)行長度分選時(shí)，初始樣品體積需≥100μL，不足時(shí)請(qǐng)用超純水補(bǔ)齊。樣品體積太小，將導(dǎo)致移液誤差增大，進(jìn)而影響分選的準(zhǔn)確性。
使用方法
1）將磁珠由冰箱中取出，室溫平衡至少30 min。配制80%乙醇。
2）渦旋振蕩或充分顛倒磁珠以保證充分混勻。
3）按下表吸取不同比例的Hieff NGSTM Smarter DNA Clean Beads至DNA溶液中，室溫孵育5 min。
4）將PCR管短暫離心并置于磁力架中分離磁珠和液體，待溶液澄清后（約5 min），小心移除上清。
5）保持PCR管始終置于磁力架中，加入200μL新鮮配制的80%乙醇漂洗磁珠，室溫孵育30 sec后，小心移除上清。
6）重復(fù)步驟5，總計(jì)漂洗2次。
7）保持PCR管始終置于磁力架中，開蓋空氣干燥磁珠至剛剛出現(xiàn)龜裂（約5 min）。8）將PCR管從磁力架中取出，加入21μL ddH2O(≥20μL)，渦旋振蕩或使用移液器輕輕吹打至充分混勻，室溫靜置5 min。
9）將PCR管短暫離心并置于磁力架中靜置，待溶液澄清后（約5 min），小心移取20μL上清至新PCR管中，勿觸碰磁珠。
10）檢測DNA濃度與純化效果。
應(yīng)用[8][9]
小型DNA清潔磁珠可用于提取實(shí)驗(yàn)中的DNA純化：
為建立以磁分離技術(shù)為核心的分離系統(tǒng),探索Fe3O4/SiO2復(fù)合納米磁珠的制備條件,并以多種材料DNA提取的方法測試磁珠的生物學(xué)應(yīng)用性能,尤其探索了對(duì)于復(fù)雜PCR產(chǎn)物純化條件下片段篩選的技術(shù)可行性。Fe3O4/SiO2復(fù)合納米磁珠純化DNA的研究：Fe3O4/SiO復(fù)合納米磁珠與核酸物質(zhì)進(jìn)行提純測試實(shí)驗(yàn),包括質(zhì)粒DNA提取和分離、PCR產(chǎn)物純化,對(duì)磁珠的吸附和洗脫DNA性能進(jìn)行研究,其中重點(diǎn)研究了如何調(diào)整“磁珠緩沖液”體系以實(shí)現(xiàn)對(duì)于不同大小DNA片段的選擇性回收。
結(jié)果：1、本論文成功制備出Fe3O4/SiO2復(fù)合納米磁珠,將其應(yīng)用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中得出,該磁珠提取的質(zhì)粒DNA的回收量和回收純度與商用試劑盒相當(dāng)甚至超過它,并適應(yīng)于下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的要求。2、在使用Fe3O4/SiO2復(fù)合納米磁珠進(jìn)行擴(kuò)增產(chǎn)物的純化回收的實(shí)驗(yàn)中,通過對(duì)“磁珠+緩沖液”體系的研究,成功建立了對(duì)不同片段長度DNA的選擇性回收的技術(shù)體系：以“磁珠溶液體積：DNA樣品體積”的體積比為參數(shù),該參數(shù)為0.4-0.5時(shí)能有效去除400bp及其以下DNA片段；該參數(shù)為0.6時(shí)能有效去除200bp及其以下DNA片段；該參數(shù)為0.7-1.2時(shí)能有效去除100bp及其以下DNA片段；該參數(shù)為1.3-1.8時(shí)能有效去除100bp以下DNA片段。
參考文獻(xiàn)
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[5]Development of a novel method for operating magnetic particles,Magtration Technology,and its use for automating nucleic acid purification[J].Kimimichi Obata,Osamu Segawa,Mitsuru Yakabe,Yoshikazu Ishida,Toshihiro Kuroita,Katsunori Ikeda,Bunsei Kawakami,Yoshihisa Kawamura,Masafumi Yohda,Tadashi Matsunaga,Hideji Tajima.Journal of Bioscience and Bioengineering.2001(5)
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[7]Synthesis of Iron Oxide Nanoparticles Used as MRI Contrast Agents:A Parametric Study[J].Journal of Colloid And Interface Science.1999(2)
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[9]王燮.Fe_3O_4/SiO_2復(fù)合納米磁珠制備技術(shù)的優(yōu)化及用于DNA分離純化的研究[D].北京化工大學(xué),2014.