背景^[1-7]

iPSCs標(biāo)志物檢測(cè)是通過(guò)qPCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)iPSCs細(xì)胞相關(guān)基因及表達(dá)蛋白。蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)即western blot，是將電泳分離后的蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相膜上，然后用特異性抗體檢測(cè)某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于基因在蛋白水平的表達(dá)研究、抗體活性檢測(cè)和疾病早期診斷等多個(gè)方面。

在iPSCs發(fā)現(xiàn)的十年里，iPSCs技術(shù)在干細(xì)胞基礎(chǔ)研究、細(xì)胞命運(yùn)調(diào)控、藥物篩選、疾病模擬、細(xì)胞治療等多個(gè)方面都取得了影響深刻的進(jìn)展，iPSCs技術(shù)的逐漸成熟，大大提高了干細(xì)胞的可獲得性，降低了干細(xì)胞的體外培養(yǎng)成本，細(xì)胞來(lái)源和誘導(dǎo)方式的多樣化都有了很大進(jìn)步，更令人激動(dòng)人心的是，日本開展了首例iPSCs患者試驗(yàn)治療的臨床案例，標(biāo)志著iPSCs技術(shù)走向臨床應(yīng)用，安全性和應(yīng)用性有了很大提高。

iPSCs技術(shù)除了上述提到的建立罕見病模型，在發(fā)病機(jī)制和功能上進(jìn)行深入探究外，在藥物篩選、臨床治療等方面亦具有廣泛應(yīng)用。在有效疾病模型的基礎(chǔ)上，探究罕見病的病理生理學(xué)進(jìn)程，利用功能細(xì)胞篩選新型藥物，可推進(jìn)細(xì)胞或組織治療等再生醫(yī)學(xué)的發(fā)展，達(dá)到干細(xì)胞研究的最終目的。

結(jié)合基因編輯技術(shù)，具體應(yīng)用流程，重編程罕見病患者的體細(xì)胞，誘導(dǎo)得到患者特異性iPSCs，結(jié)合基因編輯工具修正患病基因得到同型對(duì)照組，兩組細(xì)胞系均分化產(chǎn)生大量的功能細(xì)胞，在體外再現(xiàn)疾病表型，在此基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)新的診斷標(biāo)志物、篩選安全有效的藥物、替換患病的細(xì)胞或組織。這種定制化的治療方法可以避免免疫排斥和倫理學(xué)爭(zhēng)議。采用人的疾病模型來(lái)模擬這些復(fù)雜、多樣的癥狀，可更深入剖析發(fā)病機(jī)制、開發(fā)新的治療方法。

iPSCs技術(shù)在罕見病建模方面具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，并成功建立了單基因、多基因、遲發(fā)性罕見病疾病模型，該模型已成為藥物篩選、藥物毒性研究、個(gè)性化細(xì)胞治療的有效工具，推動(dòng)了精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展。隨著高通量測(cè)序、基因編輯技術(shù)和小分子篩選技術(shù)的突破，與這些技術(shù)結(jié)合起來(lái)，開發(fā)罕見病的治療干預(yù)措施，將為罕見病患者的診治帶來(lái)前所未有的希望。

應(yīng)用^[8][9]

iPSCs標(biāo)志物檢測(cè)可用于檢測(cè)誘導(dǎo)iPSCs細(xì)胞過(guò)程中相關(guān)基因及表達(dá)蛋白的種類及水平：

PSCs細(xì)胞具有類似于ESCs的多向分化特性,在特定的誘導(dǎo)條件下既可向造血干/祖細(xì)胞分化,也可向成熟的血細(xì)胞如紅細(xì)胞、單核細(xì)胞和NK細(xì)胞等分化。為此,誘導(dǎo)產(chǎn)生白血病病人特異性的iPSCs或許將對(duì)白血病的治療帶來(lái)新的突破。急性白血病是兒童時(shí)期最常見的血液系統(tǒng)腫瘤,約占該時(shí)期所有惡性腫瘤的35%。生物學(xué)特性分析：通過(guò)RT-PCR和Real-Time PCR檢測(cè)檢測(cè)MSCs中iPSCs相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因表達(dá)；通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光法檢測(cè)MSCs中多能性標(biāo)記物如SSEA4.TRA.1-60.TRA-1-81等的表達(dá)情況。

3hBM-MSCs來(lái)源的iPSCs樣細(xì)胞株的建立及其生物學(xué)特性鑒定隨著危險(xiǎn)分組治療的開展、化療方案的進(jìn)步和支持治療的改善,ALL長(zhǎng)期無(wú)病生存率可達(dá)70%～80%,而AML的長(zhǎng)期無(wú)病生存率可達(dá)50%左右。但仍有部分病例早期復(fù)發(fā)或治療失敗,HSCT是該部分患者的選擇。但造血干細(xì)胞移植的成敗與HLA的配型密切相關(guān),如果HLA不相合,便可能會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的排異反應(yīng),甚至危及生命。目前國(guó)際上推薦首選HLA匹配相關(guān)供者的HSCT,但由于80%的兒童白血病患者缺少這種供者,auto-HSCT也被選擇性地應(yīng)用于白血病的治療。

auto-HSCT的不足之處是白血病的復(fù)發(fā)率高,移植治療后復(fù)發(fā)的原因主要是自體移植物中殘余的白血病細(xì)胞(其中還可能包括極少量的白血病干細(xì)胞)隨著移植物再次輸入人體內(nèi)以及移植后無(wú)移植物抗白血病(GVL)效應(yīng)。為此,尋找一種全新的非腫瘤細(xì)胞來(lái)源的自體干細(xì)胞進(jìn)行移植對(duì)于降低移植后白血病復(fù)發(fā)具有重要的科學(xué)意義和臨床應(yīng)用前景。

參考文獻(xiàn)

[1]Pluripotent stem cell-derived natural killer cells for cancer therapy[J].David A.Knorr,Dan S.Kaufman.Translational Research.2010(3)

[2]Concise Review:Isoforms of OCT4 Contribute to the Confusing Diversity in Stem Cell Biology[J].XiaWang,JianwuDai.STEM CELLS.2010(5)

[3]Oct4 and Klf4 Reprogram Dermal Papilla Cells into Induced Pluripotent Stem Cells[J].Su‐YiTsai,CarlosClavel,SooKim,Yen‐SinAng,LauraGrisanti,Dung‐FangLee,KevinKelley,MichaelRendl.STEM CELLS.2010(2)

[4]Hematopoietic Development from Human Induced Pluripotent Stem Cells[J].ClaudiaLengerke,MatthiasGrauer,Nina I.Niebuhr,TamaraRiedt,LotharKanz,In‐HyunPark,George Q.Daley.Annals of the New York Academy of Sciences.2009(1)

[5]Generation of mature human myelomonocytic cells through expansion and differentiation of pluripotent stem cell-derived lin-CD34^sup+^CD43+CD45^sup+^progenitors[J].Choi,Kyung-Dal,Vodyanik,Maxim A,Slukvin,Igor I.Journal of Clinical Investigation.2009(9)

[6]Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Human Cord Blood[J].Cell Stem Cell.2009(4)

[7]Generation of Induced Pluripotent Stem Cells Using Recombinant Proteins[J].Cell Stem Cell.2009(5)

[8]Oct4-Induced Pluripotency in Adult Neural Stem Cells[J].Cell.2009(3)

[9]郭曉萍.兒童白血病病人特異性誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSCs）樣細(xì)胞株的建立及其生物學(xué)特性研究[D].浙江大學(xué),2012.