背景^[1-7]

大提柱式DNA清除劑可用于細胞總RNA樣品中基因組DNA污染的去除。目前最常用的RNase-free DNase處理方法因DNase中所含殘留的RNase能破壞RNA完整性而具有很大缺陷。由于血液富含RNase，因此血液RNA非常容易降解，是臨床分子生物學(xué)研究中的一個棘手的問題。

大提柱式DNA清除劑能快速滲透到新鮮血液細胞內(nèi)，抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常溫可放置3天，4℃可放置5天，-20℃可放置3個月。將大提柱式DNA清除劑與新鮮血液樣品按4:1的比例（4份本產(chǎn)品加1份新鮮血液）混合后即可放置。放置結(jié)束后將樣品轉(zhuǎn)移到離心管中，5000 g室溫離心1分鐘，小心吸出淺粉紅色的上清液，棕紅色沉淀（血細胞和蛋白沉淀）直接用于后續(xù)的總RNA提取。

大提柱式DNA清除劑特點：

1.處理量大，一次可以處理高達400μg的總RNA。

2.操作簡單快速，全部操作只需要十余分鐘。

3.回收率高達80%以上。

4.高效，能使總RNA中的基因組DNA污染降低到電泳檢測不到的水平，而RNA分子完整性不受任何影響。

5.本身不含RNase污染，避免了用DNase處理的問題。

6.穩(wěn)定，本產(chǎn)品為非酶產(chǎn)品，可以常溫運輸和4℃長期保存；而RNase-free DNase的運輸和長期保存必須在低溫進行。

7.性價比高，單位成本遠低于RNase-free DNase。

應(yīng)用^[7][8]

大提柱式DNA清除劑可用于高純度RNA提取以及相關(guān)研究：

在小鼠胸腺上皮細胞miRNA和mRNA的年齡及性別差異性表達與功能研究中需要提取高純度的miRNA和mRNA。胸腺作為中樞免疫器官,是T細胞分化、發(fā)育和成熟的場所,在機體免疫系統(tǒng)中具有極其重要的作用。隨著年齡增長,胸腺逐漸退化,體積變小,初始T細胞輸出能力逐漸降低導(dǎo)致機體免疫力下降及免疫衰老。除年齡因素外,胸腺退化還有性別差異,有文獻報道,與雄性動物相比,雌性動物的胸腺生長的時間更長,退化的速度更慢。

然而,在胸腺退化過程中究竟是年齡因素還是性別因素占主導(dǎo)作用以及怎樣發(fā)揮作用,在分子水平層面上的報道并不多。而高通量測序技術(shù)使得對一個物種的轉(zhuǎn)錄組進行細致全貌的分析成為可能,通過研究1月齡和3月齡雌、雄小鼠miRNA和mRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò),從分子水平深入揭示年齡和性別差異對胸腺退化的影響,尋找抑制胸腺退化或促進胸腺再生的新方法。

以1月齡雌性小鼠(1F)、1月齡雄性小鼠(1M)、3月齡雌性小鼠(3F)和3月齡雄性小鼠(3M)的胸腺上皮細胞(TECs)為研究對象,采用免疫熒光法、高通量測序、生物信息學(xué)分析、RT-qPCR等方法,對小鼠TECs進行鑒定,對小鼠TECs中的差異表達miRNAs和mRNAs進行分析和驗證,研究了小鼠胸腺退化過程中這些miRNAs和mRNAs之間的調(diào)控關(guān)系,并探討了這些miRNAs和mRNAs對小鼠胸腺退化的年齡和性別差異的影響。

隨后,采用CCK-8法、流式細胞術(shù)、分子克隆、雙熒光素酶報告基因、RNA干擾、RT-qPCR和Western blot等方法,對篩選出的年齡相關(guān)性miR-205-5p在小鼠胸腺上皮細胞系(MTEC1)中的生物學(xué)功能進行了研究,探討了miR-205-5p在小鼠胸腺退化過程中的調(diào)控機制。

結(jié)論:(1)確定了小鼠胸腺上皮細胞miRNAs和mRNAs表達的年齡及性別差異,為以后在分子水平研究胸腺退化提供了數(shù)據(jù)庫。(2)確定了4個差異表達miRNAs(miR-183-5p、miR-199b-5p、miR-200b-3p、miR-205-5p)和3個差異表達基因(Arg1、Cyplb1、Prkcb)可以分別作為不同年齡和不同性別小鼠胸腺發(fā)育及退化的分子標記物群。(3)確定了Fa2h是miR-205-5p的靶基因,Fa2h能正反饋調(diào)控Tfap2a表達,且Tfap2a和Fa2h促進MTEC1細胞增殖,而miR-205-5p通過靶向調(diào)控Fa2h表達抑制MTEC1細胞增殖。

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