背景及概述[1]
超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒，是一種基于魯米諾的增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光(ECL)HRP 底物，是一款具有超高靈敏度的化學(xué)發(fā)光(ECL)底物，可與二抗上耦連的辣根過(guò)氧化物酶發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，發(fā)出熒光，從而可以通過(guò)用X光片壓片或CCD成像儀檢測(cè)樣品, 當(dāng)?shù)孜锱c優(yōu)化的抗體濃度和封閉緩沖液配合使用時(shí)，可檢測(cè)到常規(guī)ECL底物無(wú)法檢測(cè)的低豐度靶蛋白。
產(chǎn)品特點(diǎn)[1]
1.用于辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的化學(xué)發(fā)光底物
2.使用適當(dāng)?shù)囊豢购投箷r(shí)，可在NC膜或PVDF膜上檢測(cè)豐度為低皮克級(jí)的蛋白條帶
3.所得信號(hào)的可定量檢測(cè)范圍跨越兩個(gè)數(shù)量級(jí)
4.通過(guò)膠片或成像系統(tǒng)進(jìn)行曝光，易于捕獲圖像
5.試劑盒組分能夠在4℃條件下穩(wěn)定放置一年
6.配方經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可適用于濃度極低的抗體檢測(cè)
7. 高信噪比，背景低
8. 發(fā)光迅速
9. 可在日光燈下進(jìn)行發(fā)光操作
10. 靈敏度高：可檢測(cè)皮克級(jí)抗原
11. 發(fā)光持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，可進(jìn)行反復(fù)曝光，進(jìn)行結(jié)果優(yōu)化，而不需重復(fù)試驗(yàn)檢測(cè)
12.超敏化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑靈敏度高，節(jié)約一抗二抗抗體
使用方法[1]
1. 制備工作液：將試劑平衡至室溫，按A液和B液等體積混合至滴瓶或自備試劑瓶，例如1ml A液和1ml B液混合，混勻組成工作液即可使用。用量以充分覆蓋印跡膜為基準(zhǔn)。每10cm2膜需要大約1 ml工作液。
2. 將印跡膜有蛋白的一面朝上平整的鋪在一張平板上，加上配好的發(fā)光底物工作液，確保工作液完全均勻覆蓋在印跡膜上。
3. 將印跡膜與工作液孵育1-5分鐘。
注意：孵育的時(shí)間可以在暗室里觀察，以判斷是否進(jìn)行后續(xù)膠片曝光。
4. 將一潔凈的保鮮膜或透明的玻璃紙平整的鋪在孵育有工作液的印跡膜上，只要保鮮膜或透明的玻璃紙比較大可以不用吸除多余的工作液，輕輕趕出其間的氣泡，再移至暗室內(nèi)或固定至X片暗盒內(nèi)。
5. 在暗室中取一張X膠片小心置于印跡膜上，或取X膠片置于暗盒內(nèi)的印跡膜上；曝光5秒至1分鐘，立即顯影定影。
注意：根據(jù)其發(fā)光的強(qiáng)度， 縮短或延長(zhǎng)X片的曝光時(shí)間（對(duì)微弱信號(hào)，曝光時(shí)間可延長(zhǎng)至數(shù)小時(shí)）,或者曝光一系列不同的時(shí)間后再顯影定影挑選一張滿意的。
6. 熒光成像儀（CCD）檢測(cè)：將印跡膜放置到熒光成像儀內(nèi)，按儀器說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)和記錄化學(xué)發(fā)光圖像。
注意事項(xiàng)[1]
1.A液和B液吸取過(guò)程中必須更換移液器槍頭，避免相互污染失效。
2.A液和B液混合為工作液后，需避免強(qiáng)氧化劑如次氯酸鈉等對(duì)工作液的影響。
3.須確保試劑瓶干凈，無(wú)微生物或其它試劑污染。
4.為了您的安全，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。
其他應(yīng)用[2]
用于檢測(cè)8-oxo-dG：將8-oxo-dG與抗8-oxo-dG抗體反應(yīng)形成特異性結(jié)合物；向特異性結(jié)合物加入抗鼠-HR多聚物，使抗鼠-HR多聚物與所述特異性結(jié)合物反應(yīng)形成8-oxo-dG、抗8-oxo-dG抗體和抗鼠-HR多聚物的三元復(fù)合物；然后向三元復(fù)合物中加入ECL化學(xué)發(fā)光底物，所述ECL化學(xué)發(fā)光底物在所述三元復(fù)合物的作用下發(fā)光；然后檢測(cè)ECL化學(xué)發(fā)光底物的發(fā)光強(qiáng)度，根據(jù)發(fā)光強(qiáng)度計(jì)算待測(cè)物中8-oxo-dG的含量。
主要參考資料
[1] 超敏ECL化學(xué)發(fā)光即用型底物說(shuō)明書
[2] CN201110095478.3 8-氧代脫氧鳥(niǎo)苷的檢測(cè)方法