DAPI全稱為4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),是一種能夠與DNA強力結合的藍色熒光染料,常用于細胞核染色。其發(fā)出的藍色熒光與其他的綠色、黃色或紅色熒光蛋白形成鮮明對比,因此多用于多色熒光技術。DAPI可以穿過細胞膜,因此可以用于活細胞和固定細胞的染色,但活細胞染色對DAPI濃度有嚴格要求,所以DAPI主要用于固定細胞染色。
DAPI溶液的配制
DAPI溶液一般使用ddH2O配制,溶液的濃度為5mg/ml,推薦DAPI溶液工作濃度為0.5-1Oμg/ml之間。
配制方法:取1mg的DAPI粉末,離心使粉末沉積在保存管底,后取1mL的ddH2O將DAPI粉未溶解,可以制備出2.9mM的DAPI溶液(1 mgDAP/1mLH2O)。此外,DAPI不可以用PBS緩沖溶液或者其他緩沖液直接進行溶解,需要先用水將其溶解。但使用時需要用PBS將DAPI儲備溶液稀釋。
保存
DAPI溶液應儲存在避光、冷藏條件下,溫度一般保持在2-8℃。避免與有機物接觸,因為DAPI易溶于有機溶劑。需要在不透光的瓶子中存放。
安全性
DAPI是一種有毒物質,需要避免與皮膚和眼睛接觸。實驗人員需要佩戴適當?shù)姆雷o手套和眼鏡。在DAPI處理樣本時,避免直接照射熒光顯微鏡的激發(fā)光源到眼睛。避免長時間曝光在DAPI的熒光光源下,以免損傷細胞樣本。在DAPI染色后,不宜長時間存放,最好在染色后立即觀察。