背景及概述^[1][2]

烏苯美司是1976年由日本學(xué)者梅澤濱夫從橄欖網(wǎng)狀鏈霉的培養(yǎng)液中分離而得的一種低分子二肽化合物，化學(xué)名為N-[(2S，3R)-3-氨基-2-羥基-4-苯丁酰]-L-亮氨酸，呈白色結(jié)晶粉末狀，易溶于冰醋酸，在水或甲醇中微溶。1987年作為具有免疫調(diào)節(jié)功能的抗癌輔助藥在日本正式上市，國(guó)內(nèi)商品名為百士欣，屬于國(guó)家二類新藥并于1998年上市應(yīng)用，由四川抗生素工業(yè)研究所研制，浙江普洛康裕制藥有限公司生產(chǎn)，且目前市場(chǎng)上的片劑和膠囊劑具有生物等效性。烏苯美司的臨床試驗(yàn)中出現(xiàn)的不良反應(yīng)主要有皮疹、紅斑以及胃腸道反應(yīng)，繼續(xù)服藥或停藥后絕大部分癥狀會(huì)自行消失。烏苯美司作為氨肽酶抑制劑，在阻抑腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、抑制腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移等方面體現(xiàn)了一定的抗腫瘤效果，與其他藥物聯(lián)合使用時(shí)發(fā)揮了較顯著的協(xié)同抗癌功能，并在免疫方面起到了不可忽視的調(diào)節(jié)作用。

作用靶點(diǎn)^[1]

現(xiàn)有研究顯示烏苯美司最主要的抑制靶點(diǎn)為氨肽酶，此酶通過(guò)水解肽段氨基端上氨基酸來(lái)降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移，在一些高侵襲性、快速增殖的惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào)。烏苯美司可通過(guò)結(jié)合氨肽酶的Zn2+和疏水活性中心抑制氨肽酶的活性。目前在烏苯美司抑制的十幾種氨肽酶中，研究較多的是氨肽酶N（aminopeptidaseN，又稱CD13）和氨肽酶B，其中又以CD13最為重要。除上述氨肽酶的共同水解作用影響腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移之外，CD13還與血管形成、病毒受體、抗原呈遞、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子相關(guān)。在2008年研制的具有烏苯美司活性的高效探針可更廣泛地檢測(cè)金屬氨肽酶在不同生物系統(tǒng)中的功能特性。

除了靶向氨肽酶，烏苯美司另一個(gè)抑制靶點(diǎn)是白三烯A4（leukotrieneA4，LTA4）水解酶，兩者結(jié)合過(guò)程中Glu-296是重要的結(jié)構(gòu)決定因素。此外，有研究者發(fā)現(xiàn)烏苯美司還是一種腫瘤二肽酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，此酶從小鼠腹水腫瘤細(xì)胞中分離純化得到，與氨肽酶結(jié)合方式不同的是，烏苯美司與二肽酶結(jié)合過(guò)程雖緩慢，但并不緊密。綜上，烏苯美司的作用靶點(diǎn)主要為氨肽酶和LTA4水解酶。

作用機(jī)制^[1]

早期認(rèn)為，烏苯美司在體內(nèi)的抗腫瘤活性是通過(guò)影響機(jī)體免疫反應(yīng)來(lái)殺傷腫瘤細(xì)胞的，如激活免疫細(xì)胞巨噬細(xì)胞，降解滅活免疫活性因子，活化粒細(xì)胞和NK細(xì)胞，促進(jìn)抗腫瘤非特異性免疫反應(yīng)等，隨后大量研究發(fā)現(xiàn)即使不通過(guò)免疫反應(yīng)，烏苯美司依然具有抗腫瘤作用，因而烏苯美司的抗腫瘤作用包括直接的以及通過(guò)免疫調(diào)節(jié)產(chǎn)生的間接抗腫瘤作用。

1. 細(xì)胞增殖抑制作用與細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)作用

2000年發(fā)現(xiàn)人早幼粒急性白血病細(xì)胞系HL60細(xì)胞增殖可被烏苯美司抑制。烏苯美司還可直接誘導(dǎo)慢性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞K562細(xì)胞產(chǎn)生凋亡效應(yīng)，抑制細(xì)胞增殖。該過(guò)程依賴于caspase-3的活化，還與絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）和糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）的磷酸化以及細(xì)胞周期蛋白D1表達(dá)受到抑制有關(guān)。在正常大腸癌細(xì)胞中死亡相關(guān)蛋白激酶（DAPK）基因啟動(dòng)子是呈甲基化狀態(tài)的，而用烏苯美司處理細(xì)胞后，該基因啟動(dòng)子逆轉(zhuǎn)為去甲基化狀態(tài)，DAPKmRNA和蛋白均恢復(fù)表達(dá)，細(xì)胞增殖被抑制并發(fā)生凋亡。另有文獻(xiàn)表明烏苯美司及其類似物通結(jié)合BIR3結(jié)構(gòu)域，致使凋亡抑制因子1自動(dòng)泛素化從而被降解，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。此外發(fā)現(xiàn)在人實(shí)體瘤細(xì)胞中，烏苯美司在不引起腫瘤細(xì)胞亡的情況下能促進(jìn)Fas激動(dòng)性抗體CH11誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞（人類宮頸癌細(xì)胞HeLaS3和纖維肉瘤細(xì)胞HT-1080）凋亡，增強(qiáng)caspase-8的活化。目前，在已成功合成的烏苯美司類似物中，LYP更有效地在體內(nèi)抑制卵巢癌ES-2移植瘤的生長(zhǎng)，其中LYP2可抑制包括HL60、A549及PLC等6種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，IC50值均低于烏苯美司，而且LYP3在ES-2和HL60腫瘤細(xì)胞中的生長(zhǎng)抑制作用同樣優(yōu)于烏苯美司。且上述類似物具有更好的水溶性及生物穩(wěn)定性，在未來(lái)的研究中可能成為烏苯美司的有效替代物。

2.  侵襲轉(zhuǎn)移抑制作用

大量研究發(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)移性腫瘤中，烏苯美司可通過(guò)抑制CD13活性進(jìn)而遏制腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移，并呈烏苯美司藥物濃度依賴性，同時(shí)伴隨小鼠存活時(shí)間的延長(zhǎng)。早期學(xué)者發(fā)現(xiàn)烏苯美司可顯著下68kDIV型膠原蛋白酶蛋白（活性形式）的表達(dá)水平，烏苯美司對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲的抑制作用可能與其影響IV型膠原蛋白酶由潛在形式向活性形式的轉(zhuǎn)化過(guò)程及腫瘤細(xì)胞膠原酶的分泌過(guò)程有關(guān)。近年來(lái)，發(fā)現(xiàn)人骨肉瘤細(xì)胞經(jīng)烏苯美司給藥處理后，MAPK與PI3K蛋白表達(dá)水平以及p38、ERK1/2和JNK磷酸化水平降低，NF-κB蛋白水平降低，同時(shí)還檢測(cè)到腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)標(biāo)志性蛋白分子基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）2和MMP9的酶活性及表達(dá)水平被抑制，腫瘤侵襲現(xiàn)象減弱。盡管CD13在前列腺癌細(xì)胞中表達(dá)含量不高，烏苯美司同樣可以通過(guò)下調(diào)CD13表達(dá)來(lái)遏制細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移，伴隨LC3B蛋白表達(dá)上調(diào)以及自噬性細(xì)胞死亡，在腎癌細(xì)胞中給藥后出現(xiàn)了上述類似現(xiàn)象，但烏苯美司是通過(guò)阻礙CD13活性，而非影響其表達(dá)含量來(lái)體現(xiàn)抑制細(xì)胞侵襲作用的。

3.  血管形成抑制作用

CD13在腫瘤血管生成過(guò)程中發(fā)揮重要作用，經(jīng)腫瘤微環(huán)境的影響因素低氧或血管形成生長(zhǎng)因子刺激后，人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）中CD13的表達(dá)升高，HUVECs的血管形成能力增強(qiáng)，烏苯美司能抑制HUVECs在基底膜基質(zhì)中形成毛細(xì)管網(wǎng)絡(luò)的能力，這種血管形成抑制作用可能與烏苯美司抑制CD13的表達(dá)相關(guān)。過(guò)絨毛膜尿囊膜血管實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，烏苯美司可抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）所引發(fā)的血管形成過(guò)程，另在視網(wǎng)膜新生血管形成模型中，同劑量烏苯美司也可阻斷低氧環(huán)境下的血管生成。此外，烏苯美司類似物L(fēng)YP能夠更加有效抑制CD13的活性，通過(guò)抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞毛細(xì)管的形成達(dá)到抗腫瘤作用。

4. 免疫調(diào)節(jié)作用

長(zhǎng)久以來(lái)，烏苯美司主要用于腫瘤的輔助治療，提高機(jī)體免疫力，減輕化療中的不良反應(yīng)，提高患者生活質(zhì)量。大量文獻(xiàn)顯示，烏苯美司用于胃癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、肺癌、急性髓系白血病、腎癌等惡性腫瘤的臨床試驗(yàn)和治療，烏苯美司會(huì)通過(guò)增加患者外周血中CD3+、CD4+淋巴細(xì)胞數(shù)量，高CD4+/CD8+比值，改善NK細(xì)胞活性，調(diào)節(jié)免疫因子，增強(qiáng)NO分泌能力及巨噬細(xì)胞吞噬功能，使外周血髓系衍生抑制細(xì)胞（myeloidderivedsuppressorcells，MDSCs）和腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（tumor-associatedmacrophages，TAMs）恢復(fù)至正常水平等生物效應(yīng)來(lái)改善機(jī)體免疫機(jī)能。2016年和2017年，研究者分別對(duì)納入標(biāo)準(zhǔn)的9項(xiàng)隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)（810例患者）以及12項(xiàng)隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)（762例患者）進(jìn)行Meta分析，收集評(píng)價(jià)烏苯美司對(duì)惡性腫瘤患者的免疫影響，結(jié)果證實(shí)了上述觀點(diǎn)。在臨床前基礎(chǔ)分子機(jī)制研究方面，科學(xué)家們的關(guān)注點(diǎn)主要集中在烏苯美司對(duì)機(jī)體中免疫效應(yīng)細(xì)胞因子的影響，除可增加IL-1和IL-2的分泌外，烏苯美司還可抑制促炎性細(xì)胞因子及趨化因子，如IL-6、CXCL8/IL-8、CCL3/巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1α等的生成及表達(dá)。

藥代動(dòng)力學(xué)^[1]

烏苯美司在體內(nèi)作用時(shí)間較短，成人單次口服30mg后1h血藥濃度達(dá)到峰值（2.2μg/ml），隨后呈雙相性下降，主要分布于肝臟、腎臟和小腸，極少數(shù)進(jìn)入紅細(xì)胞和骨骼肌。免疫細(xì)胞化學(xué)方法結(jié)果顯示，烏苯美司在小腸中主要分布于上皮細(xì)胞微絨毛、胞質(zhì)與胞核中，并在有寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（peptidetransporter，PEPT）1和PEPT2存在的部位大量聚集，且涉及有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（OAT）1和OAT3的參與。經(jīng)體內(nèi)代謝后，烏苯美司的原型以及兩種生物活性代謝產(chǎn)物(-)-N-[(2S，3R)-3-amino-2-hydroxy-4-(4'-hydroxy)phenylbutyryl]-L-leucine(OH-ubenimex)和(2S，3R)-3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutyricacid[(2S，3R)-AHPA]分別以67%~73%、9%~25%和2%~5%的比例隨尿液排出，因此，烏苯美司主要以原型形式排泄。

當(dāng)烏苯美司與其他藥物聯(lián)合用藥時(shí)，會(huì)產(chǎn)生藥物-藥物相互作用（DDIs）。有文獻(xiàn)指出，氨甲蝶呤與烏苯美司的DDI藥代動(dòng)力學(xué)機(jī)制為：兩者在腸黏膜中均由P-糖蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)，在腎臟中均由OAT轉(zhuǎn)運(yùn)。而在腎臟中頭孢克肟和烏苯美司DDI靶標(biāo)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白為PEPT1和OAT1/3[8]。體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，P糖蛋白抑制劑可顯著增加烏苯美司在腸道內(nèi)的吸收，并增強(qiáng)其藥效。白藜蘆醇通過(guò)下調(diào)多藥耐藥基因（multidrugresistance，Mdr）1和Mdr2、上調(diào)PEPT1蛋白的表達(dá)水平來(lái)促進(jìn)烏苯美司在腸道中的吸收。

適應(yīng)癥^[2]

用作免疫功能增強(qiáng)劑，用于癌癥化療、放療的輔助治療，可用于白血病、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合征及造血干細(xì)胞移植后；也用于其他實(shí)體瘤，還用于老年性免疫功能低下等。

用法與用量^[2]

口服：每日30mg，早晨空腹頓服或分3次服用，癥狀減輕或長(zhǎng)期服用時(shí)，每周服2～3次。

不良反應(yīng)^[2]

不良反應(yīng)少而輕，總發(fā)生率約為2.43%。偶有口內(nèi)不適感、惡心、嘔吐及腹瀉等胃腸道反應(yīng)；個(gè)別有肝損傷，可出現(xiàn)血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)一過(guò)性輕度升高，在服藥過(guò)程或停藥后消失；偶有頭痛、麻木感；可見皮膚發(fā)紅、輕度脫發(fā)、皮疹、瘙癢。偶有面部浮腫。

注意事項(xiàng)^[2]

對(duì)孕婦和哺乳期婦女以及兒童的安全性未確立，應(yīng)慎用。每日劑量超過(guò)200mg，可使T細(xì)胞數(shù)減少。

制劑與規(guī)格^[2]

片劑：10mg；膠囊劑：10mg、30mg。

聯(lián)合用藥^[1]

由于腫瘤的復(fù)雜性，對(duì)于一些難治愈、易復(fù)發(fā)的惡性腫瘤，傳統(tǒng)治療手段如放療、化療的治愈效果并不明顯，旨在提高療效的聯(lián)合用藥策略將是未來(lái)治療癌癥之大方向。烏苯美司現(xiàn)與多種化藥聯(lián)合用于治療腫瘤，效果明顯。近期研究

表明，烏苯美司聯(lián)合化療藥物5-氟尿嘧啶、阿霉素、亞葉酸鈣等治療肝動(dòng)脈栓塞中晚期復(fù)發(fā)性肝癌（尤其是腫瘤直徑<3cm及3~5cm的小肝癌）時(shí)，會(huì)增強(qiáng)細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞內(nèi)活性氧水平，治療效果優(yōu)于單純化療。對(duì)于晚期胃癌，與替吉奧聯(lián)合奧沙利鉑化療方案聯(lián)用后，烏苯美司能降低患者血清MMP2及MMP9水平，增強(qiáng)抗腫瘤效果。烏苯美司還可加強(qiáng)全反式維甲酸對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞增殖的抑制作用及誘導(dǎo)細(xì)胞分化的能力。此外，烏苯美司可顯著提高順鉑對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，其或成為CD13+非小細(xì)胞肺癌順鉑治療的增敏劑。

制備^[3]

烏苯美司的制備方法如下：

1)將L-亮氨酸芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽、HOBt、10倍(V/m)乙酸乙酯依次加入到反應(yīng)釜中，投料完成不斷攪拌降溫，緩慢加入DCC的乙酸乙酯溶液，加入過(guò)程體系溫度0-5℃之間。投料完成后體系在15-20℃間反應(yīng)4h，TLC跟蹤反應(yīng)終點(diǎn)(乙酸乙酯：石油醚＝2：1、紫外254nm)，得到L-亮氨酸芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽的活化酯溶液；

2)將(2S，3R)-3-芐氧甲酰胺基-2-羥基-4-苯基丁酸、10倍(V/m)10％的碳酸氫鈉溶液依次加入到反應(yīng)釜中，攪拌至完全溶解，降溫至10-15℃，快速攪拌下滴加L-亮氨酸芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽的活化酯溶液，滴加完成后在15-20℃間反應(yīng)4h左右，TLC跟蹤反應(yīng)終點(diǎn)(乙酸乙酯：石油醚＝2：1、紫外254nm)；

3)過(guò)濾分液，水相依次用7倍、2倍(V/m)乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相，乙酸乙酯相依次用6倍0.5wt％的鹽酸洗滌一次，6倍5wt％的飽和碳酸氫鈉洗滌一次，6倍純化水洗滌一次；乙酸乙酯溶液經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥2h，過(guò)濾、濃縮至干，向濃縮物中加入5倍(V/m)石油醚，攪拌2h分散，過(guò)濾、40-45℃下干燥得N-[(2S，3R)-3-芐氧甲酰胺基-2-羥基-4-苯基丁酰]-L-亮氨酸，收率94-98％；

4)在室溫下將N-[(2S，3R)-3-芐氧甲酰胺基-2-羥基-4-苯基丁酰]-L-亮氨酸、Pd/C(30％)溶解在15倍(v/m)的冰醋酸中，攪拌混合均勻后加入到反應(yīng)釜中，氮?dú)鈿錃庖来沃脫Q三次，1.5-2MPa下攪拌反應(yīng)至不吸氫為至；

5)過(guò)濾后的濾液在80℃、-0.1MPa下濃縮至干，濃縮物中加入10倍(v/m)丙酮，攪拌分散4h，過(guò)濾、40-45℃下鼓風(fēng)干燥得烏苯美司醋酸鹽；

6)將烏苯美司醋酸鹽溶解在鹽酸溶液中，溶液降溫至0-5℃之間，用15wt％的氨水調(diào)節(jié)溶液pH值至5-6。0-5℃下析晶5h，過(guò)濾，固體用丙酮打漿3h，過(guò)濾，40℃下干燥得到烏苯美司成品，收率為90.5％，

主要參考資料

[1] 烏苯美司抗腫瘤作用研究進(jìn)展

[2] 實(shí)用藥物手冊(cè)

[3] CN201710552900.0一種烏苯美司的制備方法